S100A9单克隆抗体的制备.doc

摘要:以S100A9蛋白为抗原制备鼠源单克隆抗体（McAb）,并鉴定抗体的特性。用纯化的S100A9蛋白为抗原免疫BALB/c健康雌性小鼠，取鼠脾细胞同Sp2/0骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选融合的杂交瘤细胞，用有限稀释法分离获得能够稳定分泌抗S100A9的McAb阳性克隆，并利用体内诱生法大规模制备McAb，用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体；用间接ELISA和Western Blot印迹鉴定抗体的性质。经ELISA鉴定，筛选出2株能分泌S100A9 McAb的杂交瘤细胞株，即S11D4H4D6和S13C9C10A7，效价最高的S11D4H4D6分泌的McAb为型。

Western印迹鉴定表明S100A9 McAb有良好的特异性。我们制备了具有良好特性的S100A9 McAb。

关键词：S100A9蛋白 单克隆抗体 细胞融合 鉴定抗体 

目录

摘要

Abstract

引言1

1 S100A9单克隆抗体在生物领域中的作用.2

1.1 单克隆抗体技术的发展和应用2

1.1.1 单克隆抗体的概念.2

1.1.2 单克隆抗体技术在生物领域的发展和应用.2

1.2 S100A9蛋白的功能及生物学作用.4

1.2.1 S100蛋白家族的概念及作用.4

1.2.2 S100A9蛋白的功能及在参与生物学过程中的作用.4

1.3 S100A9单克隆抗体的作用.5

2 材料与方法.5

2.1 实验材料5

2.1.1 抗原.5

2.1.2 实验动物.5

2.1.3 细胞系.5

2.1.4 主要试剂.5

2.1.5 主要培养液的配制6

2.1.6 主要仪器设备6

2.1.7 其他耗材.7

2.2 实验方法7

2.2.1 动物免疫.7

2.2.2 饲养细胞的制备.7

2.2.3 骨髓瘤细胞的制备8

2.2.4 免疫脾细胞悬液的制备8

2.2.5 细胞融合.9

2.2.6 融合细胞的观察及换液.9

2.2.7 筛选分泌抗体的杂交瘤细胞.9

2.2.8 有效稀释法对阳性孔的细胞进行克隆化培养.10

3 实验结果.11

3.1 融合数学请的效价检测11

3.2 阳性杂交瘤细胞系的筛选11

3.3 S100A9 McAb特异性的鉴定23

结论25

致谢.26

参考文献.27