特定环境下土壤微生物宏基因组文库构建与筛选.doc

摘要:宏基因组文库技术是开发利用未培养的微生物基因资源的有效途径。

采用 6种方法从特定环境土壤中提取微生物总DNA构建了以pBluescript SK为载体的基因组文库 ,共获得5600个阳性克隆,文库DNA总容量约20MB ,平均插入片段长度为4.3kb 。微生物基因组文库的成功构建 ,对于以后研究微生物学和筛选有重要意义。

关键词：特定环境土壤,宏基因组文库;拮抗;筛选  

目录

摘要

Abstract

引　　言1

1土壤DNA提取方法的研究.2

1.1 材料与方法2

1.1.1 土壤样品2

1.1.2主要试剂及仪器2

1.1.2.1主要试剂2

1.1.2.2 主要仪器2

1.1.3.土壤DNA的提取方法2

1.1.3.1玻璃珠-PVPP-溶菌酶法2

1.1.3.2玻璃珠-PVPP-SDS法3

1.1.3.3玻璃珠-PVPP-冻融法3

1.1.3.4 CTAB-SDS-冻融法4

1.1.3.5 SDS-酚氯仿抽提法4

1.1.3.6 ZR Soil Microbe DNA MiniPrep试剂盒法4

1.1.4土壤DNA的定量和纯度检测4

1.1.516SrDNA的PCR扩增5

1.2土壤DNA提取结果5

1.2.1土壤DNA的得率和纯度比较5

1.2.2琼脂糖凝胶电泳图及16Sr DNA PCR扩增电泳图6

1.3小结6

2土壤微生物宏基因组文库的构建.7

2.1材料与方法7

2.1.1实验材料试剂及仪器.7

2.1.2实验方法步骤.7

2.2实验结果与小结.9

3拮抗克隆子的初步筛选.10

3.1材料与方法.10

3.1.1实验材料.10

3.1.2培养基10

3.1.3 实验仪器.10

3.1.4实验方法步骤.11

3.2实验结果.11

结　　论.15

致    谢.16

参考文献.17