氯化锂诱变黑曲霉原生质体选育高产植酸酶菌株的研究.doc

摘要:本实验利用0.5％蜗牛酶和1％纤维素酶制备黑曲霉原生质体，在再生培养基中加入不同浓度的LiCl对原生质体进行诱变，将再生菌株进行液态发酵，并检测其植酸酶活力，从中获得一株酶活为16.24 U/mL的突变株，比出发菌株提高23.3%，该菌株具有良好的遗传稳定性。通过对不同诱变剂量下原生质体再生周期、原生质体存活率、菌株的植酸酶酶活等因素的研究，可以考虑将0.15% LiCl作为最佳诱变剂量，继续对黑曲霉原生质体进行诱变，以获得酶活更高的菌株。

关键词 植酸酶；黑曲霉；原生质体；氯化锂；诱变；液态发酵

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1植酸酶的种类及来源-1

1.1.1植酸酶的种类-1

1.1.2植酸酶的来源-1

1.2植酸酶的性质-1

1.3植酸酶的应用与发展-2

1.3.1植酸酶的应用-2

1.3.2植酸酶的发展前景-2

1.4原生质体的生物学特性-2

1.5黑曲霉原生质体的制备及再生-3

1.5.1原生质体的制备-3

1.5.2原生质体的再生-4

1.6优良菌株的选育方法-4

1.7诱变育种的步骤与方法-5

1.7.1出发菌株的选择-5

1.7.2出发菌株的纯化-5

1.7.3单孢子悬液的制备-5

1.7.4诱变剂种类的选择-5

1.7.5不同诱变的处理方式-6

1.8黑曲霉原生质体诱变育种技术研究进展-6

1.9本文研究的意义和内容-7

1.9.1本文研究的意义-7

1.9.2本文研究的内容-7

2 材料与方法-8

2.1实验材料-8

2.1.1菌种-8

2.1.2主要仪器-8

2.1.3主要试剂-9

2.2实验方法-10

2.2.1斜面活化-10

2.2.2原生质体的制备-10

2.2.3原生质体的诱变-11

2.2.4液态发酵-11

2.2.5植酸酶活性的测定-12

2.2.6菌种稳定性实验-14

2.2.7产酶曲线的测定-14

3实验结果与分析-15

3.1标准曲线的绘制-15

3.2原生质体的制备与再生-15

3.3原生质体的诱变-16

3.3.1诱变剂对原生质体再生周期的影响-16

3.3.2诱变后形态上的差异-16

3.3.3不同诱变剂量对存活率的影响-18

3.3.4初始菌株及突变株酶活的检测-19

3.3.5最佳剂量的确定-21

3.4遗传稳定性-21

3.5产酶曲线-22

结论-23

致谢-24

参考文献-25