产酸性植酸酶的黑曲霉原生质体制备研究.doc

摘要:研究不同配比的酶解液、菌丝的菌龄、酶处理的温度和时间及其他因素对黑曲霉(Aspergillus niger)原生质体的形成量的影响，并通过正交实验获得了制备黑曲霉原生质体的最适条件：纤维素酶1.0%，蜗牛酶0.5%，菌龄24h，酶解温度30℃，酶解时间2h，渗透压稳定剂0.7 mol/L氯化钠，此时，原生质体的形成率达到85%，采用固体单层培养法于28℃再生，再生率达48.53%。为原生质体技术改良黑曲霉的生产性能奠定了方法学基础，并为相关霉菌原生质体的制备提供借鉴。

关键词  酸性植酸酶；黑曲霉；原生质体；形成；再生；影响因素

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1植酸酶-1

1.1.1 植酸酶的种类-1

1.1.2 植酸酶的来源-1

1.1.3 植酸酶的性质-2

1.2原生质体的概念及制备方法-2

1.2.1原生质体的概念-2

1.2.2原生质体的制备方法-2

1.3原生质体的再生-2

1.3.1原生质体的再生-2

1.3.2原生质体的再生培养基-3

1.4 原生质体的应用与展望-3

1.4.1 原生质体的应用-3

1.4.2原生质体的展望-4

1.5本论文研究的意义和研究内容-4

1.5.1本论文研究意义-4

1.5.2本论文研究内容-5

2材料与方法-6

2.1实验材料-6

2.1.1主要试剂-6

2.1.2主要实验仪器-6

2.1.3 菌种-7

2.1.4 培养基-7

2.2 实验方法-7

2.2.1 菌株培养方法-7

2.2.2酸性植酸酶酶活力测定-8

2.3 原生质体的制备-10

2.3.1 菌丝体的培养-10

2.3.2酶解，原生质体的形成-10

2.4单因素实验优化黑曲霉原生质体的制备条件-10

2.4.1酶解时间对原生质体形成的影响-10

2.4.2酶解温度对原生质体形成的影响-10

2.4.3渗透压稳定剂对原生质体形成的影响-10

2.4.4菌龄对原生质体形成的影响-11

2.5 正交实验确定原生质制备的最优条件-11

2.6原生质体的再生及再生率计算-11

2.6.1原生质体的再生-11

2.6.2 原生质体再生率计算-11

3结果与分析-12

3.1标准曲线的测定-12

3.2菌株的确定-12

3.3酶解时间对原生质体形成的影响-13

3.4酶解温度对原生质体形成的影响-13

3.5渗透压稳定剂对原生质体形成的影响-14

3.6菌龄对原生质体形成的影响-15

3.7 正交实验确定原生质制备的最优条件-15

3.8原生质体释放的形态学观察-16

3.9 原生质体的形成率及再生率计算-17

结论-19

致谢-20

参考文献-21