阿魏酸酯酶高产菌株的筛选鉴定及发酵条件优化研究.doc

摘要:阿魏酸酯酶指能水解阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯中的酯键，将阿魏酸游离出来的一种酶。它能切断细胞壁中多糖-多糖、多糖-木质素间的交联，有利于细胞壁物质中多糖的降解和木质素的释放。

从腐烂的木质纤维中筛选了一株产阿魏酸酯酶的菌株。根据其形态特征、16S rDNA序列及系统发育分析，鉴定菌株为短小芽孢杆菌。该菌株最适温度为28~32℃，最适生长pH为6.0。该菌株在30℃、pH 6.0、装液量为60mL、接种量为6.3%、210r·min-1培养68h时，阿魏酸酯酶酶活力显著提高。同时还对离心后的粗酶液进行温度和pH试验, 发现该酶最适作用温度和pH分别为30~40℃和7.0。

关键词 阿魏酸酯酶；筛选；鉴定；优化

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 阿魏酸酯酶的研究现状-1

1.1.1 阿魏酸酯酶的分布和定位-1

1.1.2 阿魏酸酯酶的种类-1

1.1.3 阿魏酸酯酶的结构特性-2

1.1.4 阿魏酸酯酶的催化机理-2

1.1.5 阿魏酸酯酶的理化性质-3

1.1.6 阿魏酸酯酶的应用-3

1.1.7 阿魏酸的生理功能-4

1.2 阿魏酸酯酶高产菌株的研究意义-6

2 材料与方法-7

2.1 仪器与试剂-7

2.1.1 主要仪器-7

2.1.2 主要试剂-7

2.1.3 菌种-8

2.2 培养基及配置方法-8

2.3 阿魏酸酯酶菌株的筛选方法-8

2.3.1 土样处理-8

2.3.2 涂布土样-9

2.3.3 挑取单菌落到阿魏酸酯酶筛选培养基平板上-9

2.4菌种保存-9

2.5 阿魏酸酯酶酶活定义及测定-9

2.6 菌种鉴定方法-10

2.6.1 16S rDNA在菌种鉴定上的应用-10

2.6.2 菌株16S rDNA序列分析-10

3 结果与讨论-11

3.1阿魏酸酯酶高产菌株的筛选-11

3.2 魏酸酯酶高产菌株的鉴定-12

3.3 阿魏酸酯酶高产菌株的发酵条件优化研究-13

3.3.1 培养温度的影响-13

3.3.2 不同pH的影响-13

3.3.3 发酵时间的影响-14

3.3.4 接种量的影响-14

3.3.5 摇床转速的影响-15

3.3.6 装液量的影响-15

3.4 阿魏酸酯酶粗酶性质的研究-16

3.4.1 阿魏酸酯酶反应的最佳作用温度-16

3.4.2 阿魏酸酯酶的热稳定性-16

3.4.3 阿魏酸酯酶反应的最佳作用pH-17

4 结论-18

致谢-19

参考文献-20