无血清培养技术的建立_制药工程.doc

摘要:近年来，动物细胞培养已成为广泛采用的技术手段，许多生物技术科学研究和产品的生产都离不开动物细胞的培养。由于传统的含血清的细胞培养基会给生产和科研带来诸多不利因素，无血清培养基的出现是培养基发展历程上的一个里程碑。其一般是在合成培养基的基础上，引入成分完全明确的或部分明确的血清替代成分，使培养基能满足动物细胞培养的要求，又能有效的克服因使用血清所引发的问题。无血清培养基的显著优势使其在细胞培养领域得到重要的应用，并推动基因工程产品及其产业的发展。

本课题采用无锡博慧斯生物科技公司研发的无血清培养基进行细胞的驯化，目前已经使用CHO-CDM培养基成功驯化CHO-S细胞。驯化后的细胞均为悬浮生长体系，比生长速率，活细胞率和细胞密度与有血清培养过程相当。由于CHO细胞在无血清培养过程中会出现轻微的结团现象，采用静置和摇床对比实验，寻找到适宜的培养条件。以pCI为出发载体，在NotI和EcoRI之间插入VEGF165融合蛋白的片段，构建了pCI-HSA-VEGF165质粒。驯化好的细胞采用电穿孔和脂质体转染的方法转染质粒，采用Western Blot检测蛋白表达情况。本课题目的旨在为开发和建立无血清悬浮培养体系大规模生产蛋白奠定基础。

关键词：无血清；哺乳动物细胞 ；转染；蛋白表达

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论

1.1 无血清培养基的介绍

1.2 无血清培养基的优势

1.3 无血清培养基的应用

1.4 哺乳动物表达系统

1.5 国内外研究现状及存在主要问题

1.6 立项背景与意义

1.7 应用前景

1.8 主要研究内容

第2章  实验材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 无血清培养基

2.1.2 细胞株

2.1.3 主要仪器设备

2.1.4 主要试剂

2.1.5 主要试剂配制

2.1.6 培养基的配制

2.2 主要实验方法原理介绍

2.2.1 细胞转染

2.2.2 WB原理

2.3 实验方法

2.3.1 CHO-S、MDCK细胞驯化

2.3.2 CHO-S、CHO-DG44-22培养条件的优化

2.3.3 表达载体的构建

2.3.4 细胞转染

2.3.5 蛋白检测

第3章  实验结果与分析

3.1 CHO-S、MDCK细胞驯化

3. 1.1 CHO-S细胞的驯化

3. 1.2 MDCK细胞的驯化

3. 2 CHO-DG44-22、CHO-S培养条件的优化

3. 2.1 CHO-DG44-22细胞摇床培养与静置培养的对比实验

3. 2.2 CHO-S细胞摇床培养与静置培养的对比实验

3.3 表达载体的构建

3. 4 细胞转染

3.4.1 脂质体转染

3.4.2 电穿孔

3.5 蛋白检测

第4章 结论与展望

4.1 结论

4.2 不足之处及未来展望

参考文献

致谢