PARP抑制剂敏感型细胞株的筛选及作用机理的初步探讨_制药工程.doc

摘要: 聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase，PARP)是一类参与DNA修复的酶，可以以NAD+为底物，催化合成 PAR 聚合物。PARP具有保持染色体结构完整、参与DNA复制和转录的功能，在维持基因组稳定和细胞死亡过程中发挥作用。PARP在DNA损伤断裂时被激活，作为DNA损伤的分子感受器，识别、结合到DNA断裂处，激活、催化受体蛋白的聚ADP核糖基化作用，参与DNA的修复。PARP不仅在抗肿瘤方面，而且在炎症，缺血再灌注损伤和神经退行性变等疾病中发挥重要作用。由于PARP在众多病理过程起重要作用，PARP抑制剂存在广泛的研究前景。我们对PARP抑制剂在抗肿瘤方面做了初步探索，研究了PARP抑制剂对不同肿瘤细胞的抑制效果，及PARP抑制剂和其他DNA损伤药物联合作用下的细胞存活状况，筛选出敏感程度不同的肿瘤细胞，通过检测裂解细胞中PARP、BRCA2，RAD51等蛋白的表达及相互作用的情况，对PARP的作用机理进行了初步探究。

关键词：聚ADP核糖聚合酶（PARP）；PARP抑制剂；DNA修复；抗癌靶点；肿瘤细胞；PARP、BRCA2、RAD51

目录

摘要

ABSTRACT

第一章 绪论-1

1.1 PARP的概况-1

1.1.1 PARP的理化性质及蛋白结构-1

1.1.2 PARP催化的反应-1

1.1.3 PARP的生物学与病理学功能-2

1.1.4 PARP-1与肿瘤的发生和治疗-2

1.2 PARP抑制剂-2

1.2.1 PARP抑制剂的结构与种类-2

1.2.2实验所用PARP抑制剂——菲啶酮-3

1.2.3 PARP抑制剂治疗肿瘤的机理-4

  1.2.4 PARP抑制剂的研究现状.4

1.3 立体背景和意义-5

1.4 主要研究内容-5

第二章 材料及方法-7

2.1 药品试剂及仪器-7

2.1.1 材料-7

2.1.2 实验试剂-7

2.1.3 实验仪器-8

2.2 实验方法-8

2.2.1 细胞培养液配制-8

2.2.2 PBS缓冲液的配制-9

2.2.3 胰酶的配制-9

2.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）所需溶液的配制-9

2.2.5 Western blot 所需溶液配制-9

2.2.6 细胞复苏-9

2.2.7 细胞传代培养-9

2.2.8 细胞冻存-10

2.2.9 细胞计数-10

2.2.10 克隆形成实验的设计原理及方法-10

2.2.11 MTT实验的设计原理及方法-11

2.2.12 Bradford原理及方法-12

2.2.13 Western blotting原理及方法-12

第三章 结果与分析-15

3.1细胞株的培养-15

3.2 PHE、camp浓度梯度的选取-16

3.3 克隆形成实验（colony）过程-17

3.4 colony法筛选的PHE敏感细胞株结果-19

3.5 MTT法实验过程-19

3.5 MTT法筛选的PHE敏感细胞株结果-20

3.6 PHE辅助化疗药对敏感细胞株的疗效-21

3.7 Bradford蛋白浓度测定.23

3.8 western blot检测敏感细胞株中PARP、RAD51蛋白表达情况-23

第四章 结论与展望-27

4.1 结论-27

4.2 不足之处与展望-27

参考文献-27

致谢-29