重组GS115 Aor xyn10B产木聚糖酶的发酵条件优化_制药工程.doc

摘要:对毕赤酵母GS115/Aor xyn10B产木聚糖酶的发酵条件进行了初步优化，分别对单因素：发酵接种量、发酵培养基起始pH、甲醇添加量、发酵温度和诱导时间进行考察。以发酵产木聚糖酶酶活为评价指标，结果表明发酵接种量对产酶的影响最小，其他单因素发酵条件，分别在pH 5.5，甲醇添加量2.0%(v/v) ，诱导时间108 h，发酵温度30℃时，发酵产酶活性最高。设计了四因素三水平 (L9(34) ) 正交试验，初步确定最优发酵条件组合为：温度28℃，pH为5.5，甲醇添加量2.0% (v/v) ，甲醇诱导时间120 h。此条件下菌株产酶酶活可达27.327 IU/mL，初步确定影响该发酵过程的关键因素是甲醇添加量。

关键词：毕赤酵母；木聚糖酶；发酵；优化

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1 立题背景-1

1.1.1 木聚糖-1

1.1.2 木聚糖酶-1

1.1.3 毕赤酵母GS115和甲醇诱导机制-3

1.1.4 摇瓶发酵-4

1.1.5 DNS法原理-4

1.1.6 正交试验原理-5

1.1.7 国内外研究现状及存在问题-5

1.2 研究方法及意义-6

1.3 拟解决的主要问题-7

第2章 实验材料与方法-9

2.1 实验材料-9

2.1.1 菌株-9

2.1.2 实验试剂-9

2.1.3 实验仪器-9

2.2 实验方法-9

2.2.1 基本操作技术-9

2.2.2 培养基配制-11

2.2.3 选取活性最佳的菌株-11

2.2.4 菌种活化及培养基接种-11

2.2.5 DNS溶液(3, 5-二硝基水杨酸显色液) 配制-11

2.2.6 0.5%木聚糖底物溶液配制-12

2.2.7 KH2PO4·K2HPO4缓冲液(pH 6.0、1.0 mol/L）的配制-12

2.2.8 标准木糖(0.2 mg/mL) 的配制-12

2.2.9 木聚糖酶活性标准曲线-12

2.2.10 木聚糖酶活性测定方法-12

第3章 实验结果与分析-15

3.1 木聚糖酶活性标准曲线-15

3.2 单因素实验-15

3.2.1 接种量(v/v) 对产酶的影响-15

3.2.2 发酵培养基起始pH对工程菌产酶的影响-16

3.2.3 甲醇添加量(v/v) 的影响-17

3.2.4 发酵温度和诱导时间对产酶的影响-18

3.3 正交试验-20

第4章 结论与展望-21

4.1 结论-21

4.2 不足之处及未来展望-21

参考文献-23

致谢-25