亚麻刺盘孢霉双羟化DHEA的高效转化菌株选育及工艺优化_制药工程.doc

摘要:甾体化合物又称类固醇，是一类以环戊烷多氢菲为母核的化合物，具有独特生理功能。其中屈螺酮是一种设计用于模仿孕酮效果的人工合成新型孕激素，与传统口服避孕药中所含的孕激素结构完全不同，是目前药理学特性最接近天然孕酮的孕激素，兼具抗盐皮质激素和抗雄激素活性的独特优势。7α，15α-二羟基雄烯醇酮是合成屈螺酮最新工艺的关键中间体，亚麻刺盘孢霉（Colletotrichum lini）可将DHEA转化为7α，15α-二羟基雄烯醇酮。

本实验通过对亚麻刺盘孢霉Colletotrichum lini ST-1的孢子进行紫外诱变，获得了突变株A1，使产物的得率提高了5.2%。在此基础上，通过对其原始的发酵培养基成分进行优化，确定了优化碳源、氮源以及无机盐等。采用优化的培养基配方：葡萄糖 15 g/L，玉米浆9 g/L， 酵母粉9 g/L，NaCl 0.2 g/L、MgCl2 0.2 g/L、KH2PO4 0.2 g/L，7α，15α-二羟基雄烯醇酮的得率提高了18.0%。

关键词：屈螺酮；亚麻刺盘孢霉；紫外诱变；发酵优化

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1 甾体化合物概述-1

1.2 国内外研究现状及应用前景-2

1.3甾体化合物的生物转化研究-4

1.4课题研究的主要内容-6

第2章 材料与方法-7

2.1 实验材料-7

2.1.1 菌种-7

2.1.2 主要试剂-7

2.1.3 培养基-8

2.1.4 主要实验仪器-8

2.2 实验方法-8

2.2.1 培养条件-8

2.2.2 孢子悬液的制备-8

2.2.3 紫外致死率测定-8

2.2.4 诱变选育-9

2.2.5 发酵培养基成分的优化-9

2.3 分析方法-9

3.1.1 产物提取-9

3.1.1 产物定性检测-9

3.1.1 产物定量检测-9

第3章 结果与讨论-11

3.1 紫外致死率-11

3.1.1 菌株形态观察-11

3.1.2 紫外致死率曲线测定-12

3.2 紫外诱变-14

3.3 遗传稳定性实验-15

3.4 转化培养基成分优化-16

3.4.1 碳源的优化-16

3.4.2 氮源的优化-16

3.4.3 复合氮源的优化-17

3.4.4 无机盐的优化-18

3.4.5 优化培养基转化实验-18

结论与展望-21

参考文献-23

致  谢-25