王不留行对bFGF诱导血管生成的影响_制药工程.doc

摘要:目的：初步探讨王不留行有效部位对bFGF诱导血管生成的影响，为其抗肿瘤应用提供实验依据。方法：乙醇回流提取王不留行，将提取液过滤并旋转蒸干，残渣用去离子水溶解。用饱和正丁醇进行萃取，减压旋蒸回收正丁醇，去离子水复溶，真空干燥得干粉。体外采用SRB法测定细胞抑制率，蛋白质印迹法（Western blot）检测pAKT与pERK表达量的变化；体内采用小鼠腹壁Matrigel种植体的方法进行血管生成实验，实验分为阴性对照组（不加bFGF）、阳性对照组（加bFGF）、实验低剂量组（2.5 mg/(kg·d)）和高剂量组（5 mg/(kg·d)），共4组，小鼠连续14天灌胃给药。14d后将Matrigel种植体取出，进行形态学观察和组织切片Masson染色，通过免疫组织化学方法观察pAKT与pERK表达量的变化。结果：王不留行有效部位明显抑制种植体内管腔样结构的形成，且pAKT与pERK的表达量随药物浓度的增加而降低。结论：王不留行有效部位可抑制bFGF诱导的血管生成，且其抑制作用与降低pAKT与pERK的表达量有关。

关键词：王不留行有效部位；bFGF；血管生成；pAKT；pERK

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1王不留行的研究-1

1.2血管生成机制的研究-1

1.3碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及bFGF/FGFR信号转导途径的研究-2

1.3.1 bFGF及其受体-2

1.3.2 bFGF/FGFR信号转导途径-3

1.4血管生成抑制剂药物筛选方法-4

第2章 材料与方法-7

2.1药品试剂及仪器-7

2.1.1 实验材料-7

2.1.2 实验仪器-7

2.1.3 主要试剂-8

2.2 实验方法-9

2.2.1实验前期准备-9

2.2.2王不留行前处理-9

2.2.3目的物质的提取-9

2.2.4细胞培养-10

2.2.5细胞复苏-10

2.2.6细胞传代培养-10

2.2.7细胞冻存-10

2.2.8 SRB法测定药物对细胞增殖的影响-10

2.2.9 细胞总蛋白的提取-11

2.2.10蛋白印迹（ western blotting） 检测细胞蛋白的表达-11

2.2.11 Matrigel胶模型的建立-12

2.2.12解剖取材-12

2.2.13 Matrigel切片制作方法-12

2.2.14 Masson三色染色法-12

2.2.15 SABC法免疫组织化学染色-13

2.2.16显微镜观察计数-13

2.2.17统计学处理-13

第3章 结果与讨论-14

3.1王不留行有效部位对HMEC-1细胞的生长抑制率及IC50-14

3.2免疫印迹法检测王不留行有效部位对bFGF诱导血管生成的相关靶蛋白pAKT与pERK的影响-14

3.3王不留行有效部位对bFGF诱导血管生成的Matrigel种植体形态学的影响-15

3.4 Masson染色结果-16

3.5 王不留行有效部位对bFGF诱导血管生成的Matrigel种植体微血管面积的影响-16

3.6免疫组织化学方法检测王不留行有效部位对bFGF诱导血管生成的相关靶蛋白pAKT与pERK的影响-16

第4章 结论与展望-18

4.1结论-18

4.2不足之处及未来展望-18

参考文献-19

致  谢-21