酶法制备低聚甘露糖的初步研究_制药工程.doc

摘要:将重组毕赤酵母GS115/Auman5A采用经本实验室优化过的表达条件进行摇瓶发酵，获得了重组β-1,4-内切甘露聚糖酶，利用改良的DNS法对β-1,4-内切甘露聚糖酶进行了酶活测定，其酶活为53.88 U/mL。随后，采用硫酸-苯酚法对魔芋胶总糖含量进行测定，其含量为69.05%；利用DNS法对魔芋胶游离还原糖含量进行测定，其含量为3.09%；通过计算得出魔芋胶葡甘露聚糖的含量为59.36%。为探索出酶法制备低聚甘露糖的最佳工艺路线，进行了魔芋胶水解的单因素实验，结果表明pH值为4.0，酶液添加量为60 U/g，魔芋胶浓度为4%，60℃下水解8 h，魔芋胶酶解液水解率最大，其最大水解率高达61.57%。最后，利用薄层层析对上述产物进行定性分析，发现水解产物中的低聚甘露糖主要是甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖和甘露五糖，其中甘露二糖的量最大。另外，水解产物中不存在甘露糖，这进一步验证了该酶是一种内切酶。这些研究结果为利用重组β-1,4-内切甘露聚糖酶工业化酶法生产低聚甘露糖奠定了一定的理论基础。

关键词：低聚甘露糖；甘露聚糖酶；魔芋胶；水解率；薄层层析

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1低聚甘露糖-1

1.1.1低聚甘露糖简介-1

1.2 β-1,4-甘露聚糖酶-1

1.2.1 甘露低聚糖的作用机制-1

1.2.2 甘露聚糖酶的作用方式及其水解产物-2

1.2.3 甘露聚糖酶水解甘露聚糖的影响因素-2

1.2.4 甘露聚糖酶在养殖业中的应用-3

1.2.5 结语-3

1.3 本研究的目的、意义和研究路线-3

1.3.1 研究目的和意义-3

1.3.2 研究路线-4

第2章 酶法制备低聚甘露糖的最佳工艺路线-5

2.1 引言-5

2.2 材料与方法-5

2.2.1 菌种-5

2.2.2 主要试剂-5

2.2.3 主要仪器(表2-1)-5

2.2.4 培养基-6

2.2.5 试剂配制-6

2.2.6 探索酶法制备低聚甘露糖的最佳工艺路线-6

2.3 结果与讨论-8

2.3.1 β-1,4-内切甘露聚糖酶活性的标准曲线-8

2.3.2 魔芋胶总糖和游离还原糖含量测定结果-9

2.3.3 酶法制备低聚甘露糖的最佳工艺路线探索结果-10

2.4 小结-12

第3章 利用薄层层析进行水解产物相关的定性分析-12

3.1 引言-13

3.2 材料与方法-13

3.2.1 主要试剂-13

3.2.2 仪器与材料-13

3.2.3 操作方法-13

3.2.4 注意事项-15

3.3 结果与讨论-15

第4章 结论与展望-17

4.1 结论-17

4.2 不足之处与未来展望-17

参考文献-19

致谢-21