反硝化细菌的筛选鉴定及发酵条件优化_制药工程.doc

摘要:氮素是导致水体污染的一类重要污染物。目前，由氮素污染引起的水体富营养化已成为世界性的环境问题。国内外对氮素污染的治理日益重视，生物脱氮技术因其迅速安全倍受青睐，反硝化细菌是生物脱氮技术关键载体之一，本课题就反硝化细菌的选育优化做了如下研究：

1、采用稀释平板涂布分离法从采集的土壤中筛选出3株反硝化细菌，通过16S rDNA鉴定出两株，分别为鲍曼氏不动杆菌（Acinetobacter baumannii），黄色海假单胞菌（Pseudomonas xanthomarina）。

2、以脱氮率为考核指标，比较3株细菌的反硝化能力，以鲍曼氏不动杆菌最佳，脱氮率达到78.5%。

3、以鲍曼氏不动杆菌为研究对象进行发酵条件的初步优化。通过单因素实验确定菌株生长最佳pH为5.0，最佳温度为30℃；经8因素2水平的PB实验，确定碳源丁二酸钠和氮源酵母粉是影响菌株生长的关键因素；进一步通过单因素实验逐一优化碳氮源最佳浓度，得最适发酵培养基为丁二酸钠8 g/L、酵母粉6 g/L、硝酸钠0.67 g/L、磷酸二氢钾1.36 g/L、硫酸铵0.24 g/L、硫酸镁0.2 g/L，培养条件为：pH 5.0，30℃，200 rpm。

4、最适培养条件下，鲍曼氏不动杆菌发酵液OD600达7.29，约3×108 cfu/ml，较优化前提高了217%，发酵周期为14h，72 h去氮率达92.5%。 

关键词：反硝化细菌；筛选鉴定；发酵优化

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1 水资源危机—氮素污染-1

1.1.1 氮素污染及其危害-1

1.1.2 生物脱氮治理氮素污染-2

1.2 国内外研究现状及应用前景-2

1.2.1反硝化细菌及其作用机理-2

1.2.2 反硝化细菌的选育研究-3

1.2.3 反硝化细菌应用前景-3

1.3 本课题立题依据及内容-4

第2章 材料与方法-5

2.1实验材料-5

2.1.1土壤来源-5

2.1.2 主要仪器-5

2.1.3 主要试剂与工具酶-5

2.1.4 培养基-6

2.2实验方法-6

2.2.1 菌株的筛选与鉴定-6

2.2.2脱氮能力测定-9

2.2.3 菌株发酵条件优化-12

第3章 结果与讨论-13

3.1菌株筛选及鉴定-13

3.1.1反硝化细菌筛选及初步鉴定-13

3.1.2形态学观察及16S rDNA鉴定-13

3.1.3 反硝化能力测定-16

3.2 发酵条件优化-16

3.2.1菌株生长曲线测定-16

3.2.2 初始pH对菌株生长的影响-17

3.2.3 温度对菌株生长的影响-17

3.2.4 培养基关键成分分析实验-18

3.2.5 碳氮源添加量对菌株生长的影响-19

3.2.6 优化后菌株生长曲线与去氮能力-20

第4章结论与展望-23

4.1结论-23

4.2 不足之处及未来展望-23

参考文献-25

致  谢-26