重组NADH氧化酶的表达纯化.doc

摘要：目的：考察诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度3个因素对重组大肠杆菌中NADH氧化酶表达量的影响，以得到较高产量的NADH氧化酶。方法：利用IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导重组大肠杆菌中NADH氧化酶的表达，采用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达情况，使用Ni-NTA纯化目的蛋白。结论：当诱导剂浓度为1.25 mM、诱导时间为4 h、诱导温度为15 ℃时，重组大肠杆菌中的NADH氧化酶的表达量最高，可达12.34%。

关键词：NADH氧化酶  重组大肠杆菌  IPTG  诱导表达  纯化

目录

摘要

Abstract

第一章 综述-1

1.1  NADH氧化酶的研究进展-1

1.1.1 概述-1

1.1.2 NADH氧化酶分类-1

1.1.3 NADH氧化酶作用机理-2

1.1.4 NADH氧化酶的理化性质-3

1.1.5 NADH氧化酶常见菌种-3

1.1.6 NADH氧化酶克隆表达研究背景-4

1.2  研究目的和意义-5

第二章 实验部分-6

2.1  实验仪器和材料-6

2.1.1 仪器-6

2.1.2 材料-6

2.2  实验方法-9

2.2.1 NOX基因的克隆表达-9

2.2.2诱导表达条件的优化-10

2.2.3 变性聚丙酰胺凝胶电泳-10

2.2.4 蛋白灰度测定-11

2.2.5 酶的纯化-11

2.2.6 酶活测定-12

第三章 结果与分析-13

3.1  NADH氧化酶在大肠杆菌中的重组表达-13

3.2  诱导浓度对NADH氧化酶表达量的影响-13

3.3  诱导时间对NADH氧化酶表达的影响-14

3.4  诱导温度对NADH氧化酶表达的影响-15

3.5  蛋白纯化-15

3.6  NADH标准曲线-16

3.7  酶活测定-17

结论-19

致谢-20

参考文献:-21