一株化学农药降解菌的驯化与分子鉴定.doc

摘要:化学农药在我国的大规模使用对环境造成了严重的危害，化学农药残留通过食物链的堆积[1]更是对人类的身体造成了难以想象的伤害。因此，建立一种有效方法来去除和降解化学农药残留变得迫在眉睫。筛选并使用农药降解菌来降解和处理农药残留是近年来最有效和最重要的途径，具有广阔的发展前景。本实验从污水处理厂的污水和污泥中采样，通过富集和基础农药培养基的筛选驯化，而后采用平板稀释涂布的方法进行分离纯化，成功筛选分离得到一株降解性能较好的菌株，命名为菌J6。该菌株能在以农药敌敌畏为唯一碳源的培养基上正常生长。通过对菌J6的形态观察，菌落呈现乳白色，具有湿润平滑的表面，整齐的边缘等特征。通过生物公司的16s rDNA测序，测得筛选出的菌株与炭疽杆菌（Bacillus anthracis）具有极高的同源性，初步断定为炭疽杆菌（Bacillus anthracis），为后续的研究提供了条件。

关键词 化学农药；微生物降解；分离筛选；16s rDNA测序

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 化学农药的概述-1

1.1.1 农药的定义及分类-1

1.1.2 化学农药的使用现状-1

1.1.3 化学农药的危害-2

1.2 化学农药的微生物降解-3

1.2.1 化学农药降解菌的获得-3

1.2.2 降解菌降解化学农药的机理-3

1.3 研究目的及意义-4

2实验材料-5

2.1样品及来源-5

2.2 农药-5

2.3 培养基-6

2.4 主要试剂-7

2.5 主要仪器设备-8

3实验方法-9

3.1总体方法路线-9

3.2. 降解菌的筛选及驯化分离-9

3.2.1 菌株筛选-9

3.2.2 降解菌的分离和纯化-9

3.2.3 降解菌的保藏-9

3.3降解菌生理生化测定-9

3.3.1革兰氏染色-9

3.3.2葡萄糖发酵试验-10

3.3.3淀粉水解试验-10

3.3.4 V.P试验-10

3.3.5 吲哚试验-10

3.3.6氧化酶试验-10

3.3.7 接触酶试验-11

3.4 降解菌对多种农药降解谱的测定-11

3.4.1 四唑紫反应原理-11

3.4.2 实验步骤-11

3.5 降解菌的16s rDNA测序-12

3.5.1细菌微生物DNA提取-12

3.5.2 16s rDNA扩增-12

3.5.3 PCR产物回收-12

3.5.4 PCR产物连接T载体-13

4结果与分析-14

4.1菌落形态-14

4.2 菌种生理生化鉴定结果-15

4.3菌J6对多种化学农药降解结果-15

4.3.1 反应中四唑紫的颜色变化-15

4.3.3 农药降解谱结论-17

4.4实验菌株16s rDNA序列-17

4.4.1鉴定结果-18

4.5讨论-18

结论-20

致谢-21

参考文献-22