砀山梨花粉中运输过氧化氢的水通道蛋白筛选及功能验证.doc

摘要:本研究针对前期已筛选出的在砀山梨花粉中表达的4种水通道蛋白（aquproins，AQPs）进行生物信息学分析并对其是否可以运输过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）进行功能验证。借助3种酵母菌异源表达砀山梨花粉中的AQPs，在添加诱导物半乳糖且含有不同浓度H2O2的SG固体培养基中进行培养，根据3种酵母菌对外源H2O2的不同响应，可确定在Y05607酵母菌中表达的PbrPIP1、PbrPIP4增加酵母菌对H2O2的敏感性，在Y02900酵母菌中表达的PbrPIP1，PbrPIP2增加酵母菌对H2O2的敏性性，Y01540酵母菌表达不同PbrPIPs后，对H2O2的敏感性差异并不明显。结果表明，当酵母菌中表达能够运输H2O2的PbrPIPs时，会影响酵母的生长和存活，并且表明梨花粉可能通过对这些PbrPIPs表达的调控从而调节对H2O2的转运。

关键词：水通道蛋白；梨花粉；过氧化氢；运输

目录

摘要

Abstract

1.综述-1

1.1植物中水通道蛋白的分类-1

1.2植物中的水通道蛋白功能及活性调节-1

1.3水通道蛋白运输不同的底物-1

1.4活性氧及过氧化氢研究进展-2

1.5研究现状-2

1.6研究的意义-3

2.研究报告-4

2.1实验材料-4

 2.1.1植物材料-4

 2.1.2菌株及载体材料-4

 2.1.3试剂-4

2.1.4基因来源及信息-4

2.2实验方法-5

 2.2.1目的基因与蛋白序列的生物信息学分析-5

 2.2.2目的基因PCR扩增引物设计-6

 2.2.3基因克隆及载体构建-6

 2.2.4大肠杆菌的培养及其转化-6

 2.2.5 PEG-LiAc法介导酵母转化-7

 2.2.6酵母菌对外源H2O2的响应测定-8

2.3结果与分析-9

 2.3.1 PbrPIPs和AtPIPs的基因序列分析-9

 2.3.2 PbrPIPs的基因结构分析-10

 2.3.3 4种PbrPIPs氨基酸序列信息及理化性质分析-10

 2.3.4梨花粉中4种PbrPIPs跨膜区域分析-11

 2.3.5 PbrPIPs与AtPIPs的氨基酸序列图谱分析13

 2.3.6梨花粉中4种PbrPIPs蛋白二级结构分析-15

 2.3.7梨花粉中4种PbrPIPs蛋白三级结构分析-16

 2.3.8梨花粉中4种PbrPIPs基因PCR扩增结果-16

 2.3.9表达载体酶切验证结果-17

 2.3.10酵母菌对外源H2O2的敏感性-17

3.讨论-23

参考文献26

致谢29