双酚A人工抗原的合成及免疫活性检测.doc

摘要:双酚A属于小分子物质，抗原性弱，必须将其连接到载体蛋白质上，才能形成较为理想的免疫原，其苯环上的羟基属于活性基团，考虑到其可能是抗体抗原结合的位点，故保留苯环上的羟基，从BPA苯环上羟基的邻位引入一个羧基，利用其与载体蛋白上的氨基反应，进而将其与载体蛋白偶联合成双酚A人工抗原 [1]。首先通过紫外可见分光光度计测量得到的吸收峰对比参考数据以及相互之间的对比分析，从而初步判断半抗原的合成的成功以及完全抗原偶联的程度良好。然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对双酚A人工抗原分子量进行鉴定，由电泳图可以清晰的看出人工合成的双酚A全抗原与偶联用的偶联剂之间的分子条带有明显的滞后，从而有增添了偶联成功的说服力。用成功合成的人工抗原免疫8周龄的小鼠，免疫后尾静脉取血，用间接ELISA法测量免疫小鼠的抗体效价。根据酶联免疫检测结果，证实经过双酚A 人工抗原免疫后的小鼠具有明显的血清效价，从而判断双酚A人工抗原合成成功并且具有强的免疫活性。

关键词：双酚A;人工抗原;ELISA;紫外光谱;聚丙烯酰胺凝胶电泳

目录

摘要

Abstract

1 绪 论-1

1.1研究背景-1

1.2常用的检测方法简介以及研究目的-1

1.3双酚A的简介-1

1.4国内外双酚A检测的研究现状-2

1.5本文的研究内容-4

2材料和方法-5

2.1实验材料-5

2.1.1抗原合成所需材料-5

2.1.2聚丙烯酰胺凝胶电泳所需材料-6

2.1.3小鼠免疫及间接ELISA所需材料-6

2.1.4试剂的配置-7

2.2实验方法-9

2.2.1实验方法原理-9

2.2.2合成思路-11

2.2.3实验步骤-11

3结果与分析-14

3.1紫外-可见分光光度法-14

3.1.1双酚A半抗原光谱数据-14

3.1.2双酚A完全抗原光谱数据-14

3.2聚丙烯酰胺凝胶电泳法-16

3.2.1聚丙烯酰胺凝胶电泳图-16

3.2.2蛋白Marker分子量对照图-16

3.2.3电泳结论-17

3.3双酚A抗原的活性检测-17

3.3.1免疫第三周血清效价-17

3.3.2整体血清效价趋势-18

结论-20

致谢-21

参考文献-22