牛脑蛋白酶解工艺与肽谱分析.doc

摘要:课题以牛脑干粉为原料，利用碱提酸降法提取牛脑蛋白质，以多肽得率为指标，采用水解蛋白酶（Alcalase）对其进行酶解制备牛脑多肽，并对牛脑多肽的抗氧化活性和肽谱进行了研究。试验结果表明，牛脑蛋白酶解制备多肽的最优条件为蛋白酶加酶量1%，pH值7.5，酶解温度65℃，酶解时间1.5h，料液比1:16。此条件下，多肽得率为20.74%，水解度为19.37%。所得的牛脑多肽具有一定的抗氧化能力，其清除DPPH自由基的IC50为19.56 mg/mL。牛脑多肽中含量较高的氨基酸为1.12%丝氨酸、1.84%甘氨酸、0.66%组氨酸、1.98%谷氨酸、2.62%天门冬氨酸、2.52%丙氨酸、0.91%精氨酸、1.58%脯氨酸、0.72%赖氨酸、0.55%甲硫氨酸、2.01%缬氨酸、0.38%络氨酸、1.46%异亮氨酸、2.92%亮氨酸、2.00%苯丙氨酸。

关键词 牛脑蛋白；水解蛋白酶；酶解；多肽；肽谱分析

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 牛脑概述-1

1.2 牛脑蛋白的研究进展-1

1.3动物源多肽的研究进展-2

1.3.1 动物源多肽的来源-2

1.3.2制备、分离纯化和分析方法-3

1.3.3 生理功能-3

1.4 研究的目的及意义-5

1.5 课题研究的主要内容-5

2 材料和方法-6

2.1 实验材料与主要试剂-6

2.2 仪器与设备-7

2.3 试验方法-7

2.3.1 牛脑前期处理-7

2.3.2 牛脑蛋白的提取方法-7

2.3.3 酶解工艺条件的研究-8

2.3.4 测定方法-9

3 结果与分析-13

3.1 蛋白质标准曲线的建立-13

3.2 单因素的试验结果-13

3.2.1水解蛋白酶加酶量对牛脑多肽得率的影响-13

3.2.2酶解时间对牛脑多肽提取率的影响-14

3.2.3初始 pH对牛脑多肽提取率的影响-14

3.2.4 发酵温度对大豆肽提取率的影响-14

3.2.5 料液比对大豆肽提取率的影响-15

3.3 正交试验结果-15

3.4 验证试验结果-16

3.5 水解度的测定结果-17

3.6 DPPH清除率的测定结果-17

3.7 氨基酸及肽谱分析结果-18

3.7.1 肽谱分析结果-15

3.7.2 氨基酸分析结果-21

结论-23

致谢-24

参考文献-25