戊二醛法合成三聚氰胺人工抗原及免疫活性的研究.doc

摘要:酶联免疫法以其快速且简便的特点，非常适合大量样品的检验和筛选。本实验选用了戊二醛法合成三聚氰胺的人工抗原，戊二醛作为连接蛋白质与蛋白质最常用的双功能试剂，有两个对称的活性醛基，可分别与酶蛋白和免疫球蛋白上的游离氨基（酚基、咪唑基、巯基）以共价键的形式结合起来，利用这一特性，将牛血清蛋白（BSA）与三聚氰胺偶联，合成人工抗原。将合成后的人工抗原用蛋白电泳法进行检测，观察是否偶联成功。用合成后的人工抗原对小鼠进行免疫，通过间接酶联免疫法（ELISA）测定效价。结果表明：1、蛋白电泳实验显示的偶联物与载体蛋白进行对比，条带明显滞后说明偶联效果较好。2、紫外扫描图谱显示偶联物的特征吸收峰相比于载体蛋白的特征吸收峰发生明显偏移，人工抗原与偶联物偶联良好。3、用合成好的人工抗原免疫小鼠，利用间接酶联免疫法测效价，对比阴性小鼠，发现实验小鼠血清中的抗体效价明显,判定为阳性且效价明显。

关键词 三聚氰胺；酶联免疫法；人工抗原；戊二醛法

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1三聚氰胺的选题背景-1

1.2三聚氰胺的性质及应用-1

1.2.1物理性质-1

1.2.2化学性质-1

1.2.3生产工艺与用途-1

1.2.4三聚氰胺伪蛋白原理-2

1.3三聚氰胺的毒理学性质-2

1.3.1食品中三聚氰胺的来源及其存在形式-2

1.3.2三聚氰胺致毒机理-2

1.3.3 三聚氰胺的代谢规律-3

1.4三聚氰胺检测方法-3

1.5本课题的研究内容与目标-3

1.5.1研究意义-3

1.5.2内容与目标-4

2 材料与方法-5

2.1材料-5

2.1.1主要试剂-5

2.1.2主要仪器-6

2.1.3主要溶液-6

2.2方法-7

2.2.1人工抗原的合成-7

2.2.2人工抗原的鉴定-7

2.2.3多克隆抗体的制备-9

2.2.4抗血清效价的测定-9

3结果与分析-11

3.1蛋白电泳-11

3.2紫外扫描-12

3.3 ELISA测定-14

结论-15

致谢-16

参考文献-17

附录-19