右旋糖苷偶联修饰生姜蛋白酶反应体系的研究.doc

摘要:本研究运用乙醇沉淀法提取得到生姜蛋白酶粗粉，将沉淀自然风干，即为生姜蛋白酶粗粉，放在冰箱中冷藏保存即可。

以高碘酸钠活化的不同相对分子质量的右旋糖苷对生姜蛋白酶分子上的游离氨基进行偶联结合修饰，以修饰酶的比酶活为测定指标，选用L9(34)正交实验方案，最终确定了活化后的右旋糖苷对生姜蛋白酶修饰的最佳条件：pH为6.5，温度为35℃，右旋糖苷：酶摩尔为10:1，修饰时间为4h。

粗酶和修饰酶的酶学性对照证明：以酪蛋白作为底物时，修饰酶的最适温度、最适pH较天然酶有所降低，热稳定性比天然酶显著增强。

关键词 生姜蛋白酶；右旋糖苷；修饰率；酶学性质

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1生姜蛋白酶的研究意义-1

1.2生姜蛋白酶的应用-1

1.3 生姜蛋白酶的研究概况-2

1.4生姜蛋白酶的化学修饰-2

1.4.1酶化学修饰的原理-2

1.4.2右旋糖苷对酶的修饰-3

1.5本课题研究的内容及意义-3

2 材料与方法-5

2.1实验材料与仪器设备-5

2.1.1实验材料与试剂-5

2.1.2 主要仪器与设备-5

2.2 实验方法-6

2.2.1技术路线-6

2.2.2生姜蛋白粗酶的提取-6

2.2.3蛋白质含量的测定—考马斯亮蓝法-7

2.2.4 生姜蛋白酶活力的测定-8

2.2.5 生姜蛋白酶的化学修饰-8

3结果与分析-11

3.1蛋白质浓度标准曲线的绘制-11

3.2酪氨酸标准曲线的绘制-11

3.3 右旋糖苷分子量的确定-11

3.4 右旋糖苷修饰生姜蛋白酶的单因素试验结果-12

3.4.1 活化右旋糖苷与酶摩尔比对右旋糖苷修饰生姜蛋白酶的影响-12

3.4.2 修饰时间对右旋糖苷修饰生姜蛋白酶的影响-12

3.4.3 pH对右旋糖苷修饰生姜蛋白酶的影响-13

3.4.4 温度对右旋糖苷修饰生姜蛋白酶的影响-13

3.5 右旋糖苷修饰生姜蛋白酶的正交试验结果-14

3.6天然酶与修饰酶部分酶学性质的比较-15

3.6.1 最适温度-15

3.6.2 最适pH-15

3.6.3热稳定性-16

结论-17

致谢-18

参考文献-19