山药中蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂的筛选.doc

摘要:本研究首先从底物浓度、酶的用量、酶反应时间、抑制剂溶剂干扰共4个因素对PTP1B抑制剂的高通量快速筛选平台进行优化。其后，利用优化的筛选平台对6种醇提物样品进行初筛，筛选到2种抑制率大于70%的样品分别为山药醇提物和银杏醇提物。接着，将山药醇提物浓缩液用水溶解后，再次分别用乙酸乙酯、石油醚、正丁醇三种有机物试剂进行萃取。得到乙酸乙酯相、石油醚相、正丁醇相、水相这四种不同极性的提取物，分别测这四种不同极性组分对PTP1B酶的抑制率，筛选出对PTP1B酶活抑制率最大的山药水相。最后，将山药水相稀释成不同浓度，根据其对PTP1B酶的抑制率，算出它的IC50值为56.496μg/mL。

关键词 PTP1B；山药；抑制剂

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 糖尿病-1

1.1.1 糖尿病的定义-1

1.1.2 糖尿病的诊断标准-1

1.1.3 糖尿病的类型-1

1.1.4 糖尿病的临床表现-1

1.1.5 糖尿病的并发症-2

1.2 PTP-2

1.2.1 PTP的定义-2

1.2.2 PTP的家族-3

1.3 PTP1B抑制剂-3

1.3.1 PTP1B的定义-3

1.3.2 PTP1B与Ⅱ型糖尿病的关系-3

1.3.3 PTP1B抑制剂的相关化合物的研究进展-4

1.3.4 PTP1B抑制剂临床应用-5

1.4 山药-6

1.4.1 山药的概述-6

1.4.2 山药的营养成分-6

1.4.3 山药与糖尿病关系-7

1.5本研究目的与意义-7

2 材料与方法-8

2.1 材料-8

2.1.1 原料-8

2.1.2 试剂-8

2.1.3 仪器-8

2.2 方法-8

2.2.1 山药醇提与有机试剂萃取-8

2.2.2 对硝基苯酚标准曲线的制作-9

2.2.3 PTP1B活力测定及高通量筛选模型的优化-9

2.2.4 山药中抑制PTP1B活性部位的筛选-9

2.2.5 抑制率的测定-10

2.2.6 抑制类型的测定-10

3 结果与分析-11

3.1 PNP的标准曲线-11

3.2 对底物p-NPP浓度的筛选-11

3.3 确定酶的最适用量及最适反应时间-11

3.4 DMSO对酶活性的影响-12

3.5 钒酸钠在不同浓度梯度时抑制率的IC50值-12

3.6 醇提物的筛选-13

3.7 去皮山药肉中不同极性部分的提取率-13

3.8 山药不同极性萃取物的筛选-14

3.9 山药水相不同浓度梯度抑制率的IC50值-14

结论-16

致谢-17

参考文献-18