右旋糖苷修饰生姜蛋白酶产物的分离纯化研究.doc

摘要:本研究采用乙醇沉淀法提取生姜蛋白酶的粗粉，采用不同情况下右旋糖苷对生姜蛋白酶的修饰情况，最终确定活化后的右旋糖苷对生姜蛋白酶修饰的最佳条件。结果表明：修饰时间为4h，pH为6.5，温度为35℃，右旋糖苷：酶摩尔比为10:1的条件下修饰效果最佳，即修饰酶的酶活性为551.013U/mg。

将修饰后的酶液在超滤膜下进行超滤，得到纯化后的浓缩液Ⅱ（分子量10000-100000），研究超滤后纯化酶的纯化倍数及酶活回收率。结果表明：以生姜原汁比酶活为基准，超滤浓缩液Ⅱ纯化倍数达到2.45。

将修饰酶粗粉分别经葡聚糖凝胶G-75层析和纤维素DE-52离子交换层析进一步纯化，研究葡聚糖凝胶G-75纯化酶和纤维素DE-52纯化酶的纯化倍数及酶活回收率。结果表明：以生姜原汁比酶活为基准，经过G-75纯化后，比活力纯化倍数达到3.03倍，纯化效果比较理想；经纤维素DE-52离子交换层析后出现四个蛋白峰，测得第二、三个峰有酶活性，第三个峰酶活性最高，是原姜汁的3.22倍。

关键词  生姜蛋白酶；提取；右旋糖苷；分离纯化

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 蛋白酶的研究概况-1

1.2 研究生姜蛋白酶的意义-2

1.3 本课题研究的内容-2

2 材料与方法-3

2.1 实验材料与设备-3

2.1.1 主要材料-3

2.1.2 主要试剂-3

2.1.3 主要仪器-3

2.2 实验方法和步骤-4

2.2.1 技术路线-4

2.2.2 生姜蛋白酶的提取-5

2.2.3 右旋糖苷修饰生姜蛋白酶-5

2.2.4 正交试验-5

2.2.5 超滤分离-5

2.2.6 Sephadex G-75柱层析-6

2.2.7 纤维素DE-52柱层析-6

2.2.8 蛋白质含量的测定-7

2.2.9 活力的测定-7

3 结果与分析-9

3.1 生姜蛋白酶的修饰研究结果-9

3.1.1 考马斯亮蓝测定蛋白质含量标准曲线的绘制-9

3.1.2 酶活力测定标准曲线的绘制-9

3.1.3 修饰最佳工艺条件的确定-10

3.2 修饰酶的分离纯化-10

3.2.1 超滤分离纯化-10

3.2.2 Sephadex G-75层析分离纯化-11

3.2.3 纤维素DE-52柱层析的分离纯化-12

结论-14

致谢-14

参考文献-15