蛹虫草菌株的复壮新技术及子实体生物活性研究.doc

摘要:本实验以蛹虫草为研究对象，对蛹虫草的复壮新技术及子实体生物活性进行研究，对菌株进行单孢子分离，用凝胶电泳对其交配型基因鉴定，将分离得到的单胞株进行配对，以获得新一代的菌株，经过5次传代后，进行出草实验对其子实体产量测定，并以高效液相色谱法（HPLC）子实体中虫草素，腺苷和多糖含量进行检测。并对虫草多糖进行抗氧化和抑菌试验。经实验可以得出，(1)分离得到的交配型基因只有两种MAT1-1和MAT1-2；(2)复壮后的菌株经过5次传代其子实体产量都要远远高于退化菌株且与原始菌株产量相当；(3) 复壮菌株所生产的子实体中虫草素含量为1.97mg/g，腺苷含量为1.14 mg/g，多糖质量分数为13.29%。而出发菌株虫草素、腺苷和多糖含量仅为0.92 mg/g，0.33 mg/g，4.81% ；(4)通过体外实验测定多糖对DPPH的清除率，得到当多糖浓度为0.55g/L时，DPPH的清除率为50%； (5)使用牛津杯法测得蛹虫草多糖对金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌有抑菌活性，抑菌圈直径分别为15.2mm和20.4mm，对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌没有抑菌活性。经实验证明复壮后的菌株所得子实体生产性能很稳定。

关键词：蛹虫草；复壮；子实体；活性

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 虫草的简介-1

1.1.1 蛹虫草-1

1.1.2 蛹虫草药用价值研究-1

1.1.3蛹虫草子实体生物活性研究-2

1.2 蛹虫草复壮技术-2

1.3 单孢分离技术-3

1.4 蛹虫草人工育种-3

1.5 课题研究目的及意义-4

2 材料与方法-5

2.1供试菌种-5

2.2 主要试剂-5

2.3仪器与设备-5

2.4 培养基-6

2.5 实验与方法-6

2.5.1 菌种活化-6

2.5.2 蛹虫草菌株的复壮-6

2.5.3 菌株生产性能的测定-8

2.5.4抗氧化活性检测-9

2.5.5抑菌实验-9

3 结果与分析-10

3.1 蛹虫草单孢子的分离-10

3.2单孢子菌株基因型鉴定-10

3.3复壮菌株制备结果-11

3.4子实体生物活性-11

3.4.1子实体产量-11

3.4.2子实体中腺苷、虫草素和多糖含量测定-12

3.4.3抗氧化活性-15

3.4.4抑菌性-15

结论-17

致谢-18

参考文献-19