链霉菌转谷氨酰胺酶基因克隆初步分析.doc

摘要:转谷氨酰胺酶是可以使蛋白质发生交联的一种酶，能改变蛋白质的结构，改善蛋白质的塑性、持水能力、水溶性、热稳定性等功能特性。借助微生物方法来达到转谷氨酰胺酶大规模生产的目的。所以，可应用微生物方法提取转谷氨酰胺酶，并在食品行业进行推广。本实验利用基因工程克隆技术来提高菌株表达该类酶的数量，活化并筛选链霉菌，提取链霉菌HMJ-7的基因组作为模板，利用PCR仪扩增获得转谷氨酰胺酶的基因，连接到T载体上进行测序，通过Genebank进行blast分析，确定该序列为转谷氨酰胺酶基因。

关键词 链霉菌HMJ-7；转谷氨酰胺酶；PCR扩增；基因克隆

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1．1转谷氨酰胺酶的概述-1

1．2转谷氨酰胺酶的催化机制-1

1．3-微生物产生的转谷氨酰胺酶简介-2

1．3．1不同来源的转谷氨酰胺酶理化性质的比较-2

1．3．2微生物转谷氨酰胺酶的优势-3

1．4转谷氨酰胺酶在食品中的应用-3

1．4．1转谷氨酰胺酶在肉制品中的应用-3

1．4．2转谷氨酰胺酶在乳制品中的应用-3

1．4．3转谷氨酰胺酶在水产品中的应用-4

1．4．4转谷氨酰胺酶在小麦粉制品中的应用-4

1．5本论文的立题背景和研究的目的意义-4

1．6本论文研究的内容-5

2 材料与方法-5

2．1 实验材料-5

2．1．1 菌株及质粒-5

2．1．1．1菌株-5

2．1．1．2 质粒-5

2．1．2培养基-6

2．1．3仪器设备-6

2．1．4实验用试剂-6

2．1．5溶液配制-7

2．2 实验方法-7

2．2．1菌株的活化-7

2．2．2发酵上清液的制备-7

2．2．3产酶菌株的筛选-8

2．2．4 链霉菌菌株基因组的提取-8

2．2．5 转谷氨酰胺酶基因的PCR克隆-9

2．2．6转谷氨酰胺酶基因与克隆载体的连接与转化-9

2．2．6．1转谷氨酰胺酶基因与克隆载体的连接-9

2．2．6．2连接产物的转化-10

3 结果与讨论-11

3．1产酶菌株的筛选-11

3．2微波法提取链霉菌菌株基因组DNA-11

3．3酶基因PCR扩增结果-12

3．4酶基因与克隆载体的连接结果-13

3．5酶基因测序及blast分析-14

结论-16

致谢-17

参考文献-18