产耐酸性菊粉酶真菌菌株的筛选鉴定.doc

摘要:菊粉富含于多种菊科植物中,其中菊芋含量最为丰富。菊芋适应性强,耐贫痔,栽培方便,产量高,优良的原料可制备果糖或高果糖和菊粉低聚糖，燃料酒精。菊粉酶是天然果聚糖的水解酶,许多微生物均可以产生菊粉酶。很多发达国家对菊粉酶进行了研究，我国目前对菊粉酶生产糖浆仍处于起步状态，国外对此技术利用较多。因此利用菊粉酶水解菊粉出产果糖或低聚果糖具有重大的开发应用工业化生产潜力。

从土壤肥沃草木茂盛的不同地点各取土样，对土样进行振荡、水域加热等初步处理后制作不同梯度浓度稀释液并标号。用虎红培养基做为初筛培养基，将不同浓度的稀释液涂布于初筛培养基上进行发酵培养并观察，得到16株不同的菌株。然后将16株菌株接种到复筛培养基上分别进行培养观察。培养2—3天后筛选发现J6、J13以及J14产菊粉酶活力较高。将产酶活性较高的J6、J13以及J14三株菌株接种分离培养基上进行发酵培养并观察。经过2-3天培养后只有J13表现出较高的产酶能力。

   将上述得到的菌株用显微镜观察并进行基因测序鉴定确认为黑曲霉，将它命名为J13-黑曲霉。

 关键词  菊粉 ；菊粉酶 ；土样 ；培养基；黑曲霉

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1菊粉-1

1.1.1菊粉的简介-1

1.1.2菊粉的来源-1

1.2菊粉的应用-2

1.2.1菊粉的工艺-2

1.2.2菊粉的功效-2

1.3菊粉酶-2

1.3.1菊粉酶的简介-2

1.3.2菊粉酶的由来-2

1.3.3菊粉酶的分类-3

1.4菊粉酶的进展及应用-3

1.4.1菊粉酶的进展-3

1.4.2菊粉酶的应用-3

1.5本文研究的背景及意义-4

2 材料与方法-5

2.1实验材料-5

2.1.1土样的由来-5

2.1.2实验材料菊粉-5

2.1.3主要仪器-5

2.1.4主要试剂-6

2.1.5初筛培养基-6

2.1.6复筛培养基-6

2.1.7分离培养基-6

2.1.8发酵培养基-7

2.1.9 PDA培养基-7

2.2 实验方法-7

2.2.1土样的处理-7

2.2.2菊粉的制备-7

2.2.3菌株的初筛培养-7

2.2.4菌株的复筛培养-8

2.2.5菌株的分离培养-8

2.2.6菌株的PDA斜面保藏-8

2.2.7发酵培养基提取液测酶活性-8

2.2.8菌株的显微观测-8

2.2.9 18S rDNA基因测序-8

3实验结果与分析-9

3.1实验结果-9

3.1.1菌株的初筛培养结果-9

3.1.2菌株的复筛培养结果-10

3.1.3菌株的分离培养的结果-11

3.1.4菌株的发酵培养酶活性测试结果-13

3.1.5菌株的显微观察结果-13

3.1.6 PDA斜面保存结果-15

3.2菌种的鉴定-15

3.2.1基因组提取-15

3.2.2 PCR扩增-15

3.2.3质粒PCR鉴定-16

3.2.4酶切鉴定-17

3.2.5 18S rDNA测序结果-17

3.3菌种鉴定结果-18

结论-19

致谢-20

参考文献-21