东方栓孔菌多糖的分离纯化及理化性质研究.doc

摘要:通过对东方栓孔菌多糖提取条件的四个因素的研究，并利用Box-Behnken设计建立数学模型，找到超声辅助提取东方栓孔菌多糖的最佳工艺；采用DEAE-离子交换纤维素柱层析分离纯化东方栓孔菌粗多糖；并分析了纯化多糖组分的理化性质。结果表明：超声辅助提取东方栓孔菌多糖的最佳工艺条件为液料比30.6 mL/g，超声功率109.8 W，提取温度40.2℃，提取时间42.2 min，在上述最佳工艺条件下东方栓孔菌粗多糖得率为7.49±0.14%。经DEAE-离子交换纤维素柱分离纯化粗多糖后，得到一个主要多糖组分（命名为PTOP）。PTOP能够完全溶解于去离子水、稀碱溶液，少量溶解于二甲基亚砜，不能溶解于无水乙醇、无水乙醚、氯仿、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯等有机溶剂；苯酚-硫酸反应呈橙黄色，证明该组分为糖类物质；双缩脲反应结果呈阴性，证明该多糖不含蛋白质；硫酸-咔唑反应呈阳性，证明该多糖含有糖醛酸；三氯化铁反应呈阴性，证明该多糖不含多酚类物质；菲林试剂反应结果呈阴性，表明该多糖不含游离还原糖；碘-碘化钾试剂反应呈阴性，表明该多糖为非淀粉类糖。

关键词：东方栓孔菌；多糖；超声辅助提取；分离纯化；理化性质

目录

摘要

Abstract

1.绪论-1

1.1东方栓孔菌的研究现状-1

1.1.1东方栓孔菌的外形特征-1

1.1.2东方栓孔菌的价值-1

1.2提取多糖的方法-2

1.2.1溶剂萃取法-2

1.2.2酶解法-2

1.2.3超声波提取法-2

1.2.4微波提取法-2

1.3多糖的分离纯化-3

1.3.1脱蛋白-3

1.3.2脱色-3

1.3.3脱盐及小分子物质的去除-3

1.3.4多糖的纯化方法-3

1.3.5多糖纯度的鉴定-3

1.4 多糖的生物活性-3

1.4.1抗肿瘤活性-3

1.4.2抑菌抗病毒活性-4

1.4.3抗氧化活性-4

1.4.4免疫调节活性-4

1.4.5降血糖、降血脂活性-4

1.5研究的意义及主要内容-4

2材料与方法-6

2.1材料-6

2.2主要仪器与试剂-6

2.2.1主要仪器-6

2.2.2主要试剂-6

2.3实验方法-8

2.3.1原料的预处理-8

2.3.2超声辅助提取东方栓孔菌多糖的工艺-8

2.3.3多糖得率测定-8

2.3.4超声辅助提取东方栓孔菌多糖工艺优化-8

2.3.5东方栓孔菌粗多糖的分离纯化-9

2.3.6东方栓孔菌多糖的基本理化性质分析-10

3结果分析-12

3.1葡萄糖的标准曲线-12

3.2单因素试验-12

3.2.1液料比对多糖得率的影响-12

3.2.2 超声波提取功率对多糖得率的影响-12

3.2.3 超声波提取时间对多糖得率的影响-13

3.2.4超声波提取温度对多糖得率的影响-13

3.3响应面优化-14

3.3.1响应面设计与结果分析-14

3.3.2两因素间的交互效应分析-16

   3.3.3验证试验-17

3.4东方栓孔菌粗多糖洗脱曲线-17

3.5东方栓孔菌多糖的基本理化性质-18

3.5.1东方栓孔菌蛋白质含量-18

3.5.2东方栓孔菌糖醛酸含量-18

3.5.3东方栓孔菌多糖的溶解性测定-18

3.5.4东方栓孔菌多糖其他理化性质-18

结论-20

致谢-21

参考文献-22