产耐热阿魏酸酯酶菌种的筛选与鉴定.doc

摘要:阿魏酸酯酶又称肉桂酸酯酶，它是一种羧酸酯酶，Faulds CB和HWilliamson G于1991年在橄榄色链霉菌(Streptomycesolivochromogens)的培养物中，第一次观测到阿魏酸酯酶可以从麦麸中释放阿魏酸。阿魏酸酯酶有广泛的用途，它可以从许多工农业副产品中释放阿魏酸，这些副产品有：麦麸、玉米麸、玉米秆、酒糟、甜菜渣、燕麦壳、麦秆、咖啡渣和苹果渣等，最近，人们也越来越多关注阿魏酸酯酶在处理这些农副产品获得阿魏酸中的应用前景。

本实验从枯枝腐叶比较多的大树下等地点的土壤中采集40种土样，土样经70℃高温水浴处理30min，用PDA培养基初筛培养得到35种真菌，再以阿魏酸乙酯为底物作复筛培养基得到6株产阿魏酸酯酶真菌的野生型菌株，其中有一株编号为J4的菌株阿魏酸酯酶活性最高，后经固体发酵培养，检测其酶活性。通过培养特征、形态学观察及18S rDNA序列分析，最终测出该菌株为黑曲霉真菌。

关键词：阿魏酸酯酶；初筛；复筛；发酵；鉴定

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 阿魏酸的存在-1

1.1.1 阿魏酸-1

1.2 阿魏酸酯酶的简介-1

1.2.1 阿魏酸酯酶的介绍-1

1.2.2 阿魏酸酯酶的微生物来源-2

1.2.3 阿魏酸酯酶的分类-2

1.2.4 阿魏酸酯酶的理化性质与催化机理-2

1.3阿魏酸酯酶的研究现状-3

1.4选题背景及意义-3

2实验材料与方法-5

2.1 主要材料-5

2.1.1培养基-5

2.1.2主要仪器-5

2.1.3主要试剂-5

2.2试验方法-6

2.2.1真菌的筛选-6

2.2.2耐热产阿魏酸酯酶菌种的初筛-6

2.2.3产阿魏酸酯酶菌种的复筛-7

2.2.4产漆酶菌株的鉴定-7

2.2.4.1培养特征-7

2.2.4.2形态学观察-7

2.2.4.3 18S rDNA序列分析-7

3 结果与讨论-13

3.1 菌种筛选-13

3.1.1 初筛-13

3.1.2复筛-13

3．2阿魏酸酯酶活检测-14

3．3耐热产阿魏酸酯酶菌株的鉴定-14

3.3.1 J4的培养特征-14

3.3.2形态学观察-15

3.3.3基因组提取-15

3.3.4 PCR扩增-15

3.3.5质粒PCR鉴定-16

3.3.6酶切鉴定-16

3.3.7 18S rDNA测序结果-16

结论-18

致谢-19

参考文献-20