阿魏酸酯酶理化特性研究.doc

摘要:阿魏酸酯酶是指能水解阿魏酸甲酯、低聚阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯中的酯键，并释放阿魏酸的一种羧酸酯酶。实验用PDA培养菌种，用麸皮做固体培养，然后盐析、透析，对阿魏酸酯酶逐步提纯，清理杂质，减少负面影响，提高阿魏酸酯酶的提取和分离纯化工艺质量。浸泡固体培养基得到了250ml的阿魏酸酯酶粗提取物，硫酸盐析法得到了60ml的精提取物，随后的透析得到了20ml的最终酶液。通过透明圈大小来检测阿魏酸酯酶的浓度高低。本实验在提取和分离纯化阿魏酸酯酶的过程中检测了蛋白质浓度、km值、最适温度、热稳定性、最适pH、酸碱稳定性、金属离子及抑制剂对阿魏酸酯酶的影响。结果表明：最佳温度为40℃，在10-40℃时，活性随着温度的升高，活性也随之变强。，酸碱稳定性较好，Hg2+等对该酶有较强的抑制作用,各抑制剂抑制作用有限，曲拉通对该酶有强烈的激活作用，测得阿魏酸酯酶蛋白质浓度为166.75ug/ml。

关键词:阿魏酸酯酶；制备；特性分析 ；透明圈

目录

摘要

Abstract

1绪论-1

1.1 阿魏酸酯酶的研究概况-1

1.1.1 阿魏酸酯酶的简介-1

1.1.2 阿魏酸的功能-1

1.1.3阿魏酸酯酶的应用-1

1.1.4阿魏酸酯酶的研究意义及内容-2

1.1.4.1 研究意义-2

1.1.4.2 研究的主要内容-2

1.1.4.3 拟解决的主要问题-2

2 材料与方法-3

2.1 原料与试剂-3

2.2 仪器与设备-3

2.3 方法-3

2.3.1 菌种培养-4

2.3.2阿魏酸酯酶粗酶液的提取工艺-4

2.3.3阿魏酸酯酶的分离纯化-5

2.3.4 理化性质的研究-6

2.3.5蛋白质浓度测定-6

3 结果与分析-7

3.1阿魏酸酯酶的制备-7

3.1.1阿魏酸酯酶的提取-7

3.1.2阿魏酸酯酶的分离-8

3.2阿魏酸酯酶的特性分析-8

3.2.1阿魏酸酯酶的酶活的测定-9

3.2.2温度对阿魏酸酯酶活性的影响-9

3.2.3阿魏酸酯酶的热稳定性-9

3.2.4 阿魏酸酯酶的最适反应pH-10

3.2.5 阿魏酸酯酶的酸碱稳定性-10

3.2.6 金属离子对阿魏酸酯酶稳定性的影响-11

3.2.7 抑制剂对阿魏酸酯酶稳定性的影响-11

3.2.8阿魏酸酯酶的蛋白质浓度-11

结论-12

致谢-13

参考文献-14