阿魏酸酯酶固态发酵条件优化研究.doc

摘要:阿魏酸酯酶又称肉桂酸酯酶，是一种羧酸酯酶，属于胞外酶，可以将阿魏酸酯酶从阿魏酸乙酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯的酯键中释放出来。阿魏酸酯酶来源范围广，但大部分由真菌分泌产生，尤其是曲霉属的丝状真菌，产酶能力强。不同微生物分泌的阿魏酸酯酶在结构与性质上有所差别。

该酶具有广泛的应用前景：在食品加工中,通过阿魏酸酯酶的水解作用,能够在植物细胞中获得更多的阿魏酸，游离出的阿魏酸的药用价值十分珍贵，已成为医药学上的研究点。在饲料生产中，经过阿魏酸酯酶水解的植物性原材料的细胞壁会变得更加疏松，使家养动物消化吸收起来更加容易。在造纸工业中，阿魏酸酯酶的使用，极大降低了工厂对化学药品的依赖，安全清洁,有利于整个生产工序。

本实验以深绿木霉为菌种，通过固态发酵法进行阿魏酸酯酶的生产。通过单因素实验，具体分析了碳源、氮源、无机盐、表面活性剂、接种量、初始pH、加水量、通气量、培养温度、培养时间这些因素对深绿木霉发酵生产阿魏酸酯酶的影响。然后得到最佳的固态发酵培养基配方：基质麸皮10g、葡萄糖2%、尿素2%、CaCl2 0.2%、吐温80 0.2%、加水量1:0.75，培养基初始pH7.0，接种量3mL，25℃下发酵4d。

利用水洗法提取阿魏酸酯酶，再经过离子交换柱进一步纯化，获得较纯净的阿魏酸酯酶。

关键词 ：阿魏酸酯酶；固体发酵；水解圈

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1阿魏酸-1

1.2阿魏酸酯酶的概述-1

1.2.1阿魏酸酯酶的来源-1

1.2.2阿魏酸酯酶的分类-1

1.2.3阿魏酸酯酶的作用机理-2

1.2.4 阿魏酸酯酶的测定方法-2

1.2.5 阿魏酸酯酶的应用-2

1.3阿魏酸酯酶的研究现状-3

1.4选题背景及意义-3

2 材料与方法-5

2.1 实验材料-5

2.1.1 供试菌株-5

2.1.2 主要仪器-5

2.1.3 主要试剂-6

2.1.4 培养基-7

2.2 试验方法-7

2.2.1 菌种活化-7

2.2.2 菌悬液制备-7

2.2.3 固态发酵培养基的优化-7

2.2.4 阿魏酸酯酶的提取-9

2.2.5 阿魏酸酯酶的理化性质研究-10

3  结果与分析-11

3.1 菌种的活化-11

3.2 阿魏酸酯酶的固态生物发酵-11

3.2.1 固态发酵温度优化-11

3.2.2 固态发酵固液比例优化-12

3.2.3 固态发酵pH优化-13

3.2.4 固态发酵通气量优化-13

3.2.5 固态发酵接种量优化-14

3.2.6 固态发酵碳源、氮源优化-15

3.2.7 固态发酵无机盐优化-17

3.2.8 固态发酵表面活性剂优化-18

3.2.9 固态发酵时间优化-19

3.2.10确定最终固态发酵条件-20

3.4 阿魏酸酯酶的理化性质研究-21

3.4.1 阿魏酸酯酶提取-21

3.4.2 AKTA-purifier离子交换层析特征-21

结论-24

致谢-25

参考文献-26