Pseudomonas sp.LT1菌株农药水解酶液提取与活性测定.doc

摘要:农药品种繁多，其中高毒性有机磷农药的普遍应用使得环境污染问题更加突出并威胁生态平衡。因而寻求一种能够切实可行的降解有机磷农药并且彻底清除农残的措施尤为重要。当前，采用有机磷农药降解酶来应对这类农药污染问题是最高效快捷的途径，所以该法具有广阔的应用前景。本实验采用的是徐州工程学院生物芯片实验室成功筛选分离得到的一株降解性能较好的菌株Pseudomonas sp.LT1，该菌株在只含有将甲基对硫磷作为唯一碳源的基础培养基上有明显的水解圈。通过对菌株的摇瓶富集培养得到大量菌体，再利用超声波破碎细胞得到胞间液，经30%和80%的硫酸铵沉淀，离心后弃去上清，用Tris-HCl缓冲液使得沉淀重新悬浮，由此获得降解酶粗酶液。降解酶粗酶液经24小时透析完全去除盐离子后，与农药甲基对硫磷反应10分钟，用紫外-可见分光光度计测得反应产物对硝基酚的吸光度为0.264，最后计算得出农药降解酶的活力为13.44 U/mL。

关键词 有机磷农药；假单胞菌LT1；超声波细胞破碎；农药降解酶；酶活力

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1农药的简介-1

1.1.1农药的概述-1

1.1.2农药的种类-1

1.1.3有机磷农药的概述-1

1.2微生物降解有机磷农药的应用-2

1.2.1有机磷农药降解菌的类别-2

1.2.2假单胞菌的简介-3

1.3降解酶的简介-3

1.4降解酶的提取-4

1.5降解酶的活性测定-5

1.6本文研究的意义-5

2 材料与方法-7

2.1实验材料-7

2.1.1菌种来源-7

2.1.2农药来源-7

2.1.3主要药品与试剂-7

2.1.4主要仪器设备-8

2.1.5培养基和工作液的配制-9

2.2实验方法-9

2.2.1降解菌的活化与培养-9

2.2.2农药水解圈的制备-9

2.2.3细胞破碎-10

2.2.4降解酶粗酶液的提取-11

2.2.5降解酶活性的测定-11

3结果与分析-14

3.1假单胞菌LT1对农药的降解情况-14

3.2对硝基酚标准曲线的绘制-14

3.3降解酶最佳反应时间的确定-14

3.4降解酶的活力计算-15

3.5讨论-16

结论-18

致谢-19

参考文献-20