重组琼胶酶基因在大肠杆菌中的优化表达.doc

摘要:本课题通过单因素试验和正交试验以琼胶酶为研究对象，利用实验室中的大肠杆菌为载体进行多次培养检测，应用3，5一二硝基水杨酸（DNS）比色法，探讨不同条件对琼胶酶活性表达的影响，得到的琼胶酶活性最高时的最适培养条件，最适培养基起始pH值为7，最适培养温度为37℃，最适接种量为60ul，最适IPTG量为60ul(25mg/ml)，最适培养基装液量为1000ul，最适培养时间为12h。用最优条件组合进行试验，得到菌液进行细胞破碎后，进行电泳和卢戈氏碘液染色检测。

关键词 菌种培养；琼胶酶基因；大肠杆菌；最适培养条件

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1琼胶-1

1.1.1琼胶相关简介-1

1.1.2琼胶酶-.2

1.1.3琼胶的利用-.2

1.2大肠杆菌-3

1.2.1大肠杆菌简介-.3

1.3 本课题的研究意义和研究内容-3

1.3.1 研究目的及意义-3

1.3.2 研究内容-.4

2 材料与方法-5

2.1 实验原料-5

2.2 实验试剂-5

2.3 实验仪器-5

2.4 菌液的制作及培养工艺流程-6

  2.4.1前期准备6

2.4.2工艺流程6

2.5 研究方法-6

2.5.1 LB培养基的制备-6

2.5.2 菌液的制备-6

2.5.3菌液活性鉴定-7

2.5.4 菌液保存-7

2.5.5 活化培养-7

2.5.6 菌液蛋白质活性的检测-7

2.5.7 初筛-7

2.5.8粗酶液的制备8

2.6 酶活力的测定-8

2.6.1 酶活力定义-8

2.6.2 DNS试剂的配制-8

2.6.3 测定方法-9

2.6.4 操作步骤-9

2.6.5葡萄糖标准曲线的制作-9

2.7 探究琼胶酶酶活性条件的正交试验-10

2.7.1培养基起始pH值对酶活性的影响10

2.7.2培养温度对酶活性的影响10

2.7.3接种量对酶活性的影响10

2.7.4 IPTG量对酶活性的影响10

2.7.5培养基装液量对酶活性的影响10

2.7.6培养时间对酶活性的影响10

2.8 细胞破碎-11

2.9 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE).11

2.10卢戈氏碘液染色检测.12

3 结果与分析-14

3.1 初筛的结果-14

3.2 葡萄糖标准曲线-14

3.3探究琼胶酶酶活性条件的正交试验结果-15

3.3.1培养基起始pH值对酶活性的影响结果15

3.3.2培养温度对酶活性的影响结果.15

3.3.3接种量对酶活性的影响结果16

3.3.4 IPTG量对酶活性的影响结果.16

3.3.5培养基装液量对酶活性的影响结果.17

3.3.6培养时间对酶活性的影响结果.17

3.4卢戈氏碘液染色的现象结果.18

结论-19

致谢-20

参考文献-21