一种食用菌寄生菌的分离、鉴定及胞外多糖的抗氧化活性研究.doc

摘要:本研究对一株食用菌的寄生菌经行分离纯化，并对其进行分子生物学鉴定。其次对其进行液体发酵，将2L发酵液浓缩至150ml后，用20%至80%的8个梯度乙醇浓度，对发酵液中多糖进行醇沉，得到的粗多糖含量在酒精浓度为80%的梯度下最高为408.27mg，可得到大概趋势为在高浓度酒精沉淀作用下得到的多糖含量越高。但是对8份粗多糖样品去蛋白等处理后进行初步抗氧活活性检测可得知抗氧化活性指标最高的组份为70%酒精浓度下的样品，其对于0.2mmol/L的DPPH自由基清除能力达到70.76%、其还原力达到49.12%、清除羟基自由基能力、铁离子螯合能力以及清除超氧阴离子能力活性在8份样品中也是最高。接着对初步样品进行在活性知指导下的分离纯化，选择抗氧化活性最高的一个组份进行纯化，分别通过DEAE52纤维素离子交换层析柱以及G150葡聚糖凝胶柱进行进一步纯化及均一性检测，得到抗氧化活性最高的纯产品。

关键词寄生菌；分离鉴定；胞外多糖；抗氧化

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 食用菌寄生菌及其胞外多糖抗氧化活性研究现状-1

1.1.1 食用菌寄生菌研究现状-1

 1.1.1.1 我国食用菌研究现状-1

 1.1.1.2 食用菌寄生菌研究进展-1

1.1.2 胞外多糖提取物抗氧化活性研究进展-2

1.2 寄生菌株的分离纯化鉴定-2

1.2.1 寄生菌株的分离-2

1.2.2 寄生菌株的纯化-2

1.2.3 菌株的鉴定-3

 1.2.3.1 生理生化测定-3

 1.2.3.2 16S rDNA序列测定及分析-3

1.3 胞外多糖的提取-3

1.3.1 胞外多糖提取-3

1.3.2 胞外多糖提纯-3

 1.3.2.1 除蛋白质-3

 1.3.2.2 除色素-3

1.3.3 胞外多糖纯化-4

 1.3.3.1 分部沉淀法-4

 1.3.3.2 柱层析法-4

1.4 抗氧化活性测定-4

1.4.1 邻二氮菲-Fe2+氧化法-4

1.4.2 清除DPPH自由基活性分析-4

1.4.3 还原能力的测定-5

1.4.4 超氧阴离子自由基的清除能力-5

1.5 研究意义及内容-5

2 材料与方法-6

2.1 菌株与培养基-6

2.1.1 供试菌株-6

2.1.2 培养基-6

2.2主要试剂-6

2.3 仪器与设备-7

2.4 方法-7

2.4.1 原材料预处理-7

2.4.2 提取工艺-8

2.4.3 抗氧化活性分析-8

 2.4.3.1清除DPPH自由基活性分析-8

 2.4.3.2还原能力的测定-9

 2.4.3.3清除羟基自由基能力的测定-9

 2.4.3.4 铁离子螯合能力的测定-9

 2.4.3.5 清除超氧阴离子能力的测定-10

2.4.4 多糖分离纯化-10

 2.4.4.1 DEAE52纤维素柱-10

 2.4.4.2 G150葡聚糖凝胶柱-10

3 结果与分析-11

3.1 菌株鉴定结果-11

3.1.1 菌株培养形态分析-11

3.1.2 16SrDNA测序结果-11

3.2 粗多糖含量以及抗氧化活性测定-12

3.2.1 葡萄糖标准液的制备及其标准曲线制定-12

3.2.2 粗多糖含量-13

3.2.3 抗氧化活性比较-14

 3.2.3.1 清除DPPH自由基能力-15

 3.2.3.2 还原力-15

 3.2.3.3 清除超氧阴离子能力-15

 3.2.3.4 清除强加自由基能力-16

3.3 DEAE-52纤维素柱纯化后吸光度曲线及抗氧化活性-16

3.3.1 DEAE-52纤维素柱纯化样品-16

3.3.2 峰值处收集样品抗氧化活性测定-17

3.4 G150葡聚糖凝胶柱纯化后吸光度曲线及抗氧化活性-17

3.4.1 G150葡聚糖凝胶柱分离纯化-17

3.4.2 峰值处收集样品抗氧化活性测定-18

3.5 G150葡聚糖凝胶柱均一性检查纯化后吸光度曲线-19

结论-20

致谢-21

参考文献-22