菊芋多酚氧化酶的分离纯化及理化性质分析.doc

摘要:本实验分为两个部分，其一是为菊芋中提取的多酚氧化酶的分离纯化，其二为菊芋多酚氧化酶的理化性质研究。为了优化菊芋多酚氧化酶的提取及分离纯化工艺，本实验通过匀浆破碎法、硫酸铵盐析、透析、离子交换层析对菊芋多酚氧化酶逐步提纯，排除了其他杂质对多酚氧化酶纯度的影响，可以看出经过多步分离纯化后，得到了纯度较高的菊芋多酚氧化酶。为了了解菊芋中提取的多酚氧化酶的理化性质本实验在获得成熟提取分离纯化菊芋多酚氧化酶的基础上考察了菊芋多酚氧化酶的最适反应温度、热稳定性、最适反应pH、酸碱稳定性、金属离子、抑制剂及底物对其的影响。得到相关数据：该酶的最适反应温度为45℃、最适反应pH为7.5；该酶在pH5.0～9.0以及50～70℃有较好的稳定性；Ag3+、Al3+、Fe2+等对该酶有较强的激活作用，半胱氨酸、叠氮化钠、β-疏基乙醇等对该酶有较强的抑制作用，邻苯二酚、2-硝基酚等底物对其有较好的催化作用。结果表明：菊芋多酚氧化酶是一钟良好的耐酸碱、常温下活性较高的多酚氧化酶。

关键词 菊芋；多酚氧化酶；分离纯化；理化性质

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1菊芋概述-1

1.2菊芋的生态功能-1

1.3菊芋的用途-1

1.4多酚氧化酶的概述-2

1.5多酚氧化酶的生理功能-2

1.5.1多酚氧化酶在酚类代谢中的作用-2

1.5.2在光合作用中的作用-2

1.5.3与植物抗病性的关系-2

1.5.4对嫁接植物生根影响-2

1.5.5对烟叶、茶叶的风格品质形成起作用-3

1.5.6其他生理功能-3

1.6多酚氧化酶的应用进展及展望-3

1.7研究的目的和意义-3

2材料和方法-5

2.1实验材料与仪器-5

2.1.1实验材料-5

2.1.2主要实验仪器-5

2.2实验方法-5

2.2.1原料预处理-5

2.2.2粗酶液的提取-5

2.2.3菊芋多酚氧化酶的分离纯化-6

2.2.4菊芋多酚氧化酶的蛋白质变性电泳-7

2.2.5多酚氧化酶的理化性质研究-8

2.2.6蛋白质浓度测定-9

3结果与分析-11

3.1菊芋PPO的分离纯化-11

3.1.1菊芋PPO的盐析-11

3.1.2菊芋PPO的盐析-11

3.1.3离子交换层析-11

3.2菊芋PPO变性蛋白质电泳结果-12

3.3菊芋PPO的理化性质-12

3.3.1菊芋PPO的活性-12

3.3.2菊芋PPO的最适pH-13

3.3.3菊芋PPO的pH稳定性-14

3.3.4菊芋PPO的最适温度-15

3.3.5菊芋PPO的热稳定性-16

3.3.6金属离子和抑制剂的稳定性-17

3.3.7不同底物对菊芋PPO的催化特性-19

3.4菊芋PPO的蛋白质浓度-20

结论-21

致谢-22

参考文献-23

附录-24