磺胺二甲嘧啶单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选.doc

摘要:磺胺类药物(Sulfonamides SAs)是拥有对氨基苯磺酰胺母核构造的一种药物的总称,常在食物型动物养殖中使用大量的由SAs制成得兽药,这对于动物的疾病治疗有很大的功效。磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine SM2)及其衍生物都是SAs的一类,他可以抑制细菌得生长，几乎无毒，有稳定的性质，成本也比较低,尤其对链球菌和葡萄球菌具有很好的抑制作用。根据SM2得结构式及前人的经验并查找有关抗原的合成方法的相关文献，本次实验中也采用戊二醛法合成了人工抗原。使用纯化后的免疫抗原免疫巴比赛小母鼠，经多次免疫结束后利用酶联免疫吸附方法(ELISA)检验小鼠血清中抗体的效价，达到理论上的要求从而说明产生了抗体。最后对效价结果高的小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞的进行融合，使用有限稀释法来筛选，最终测得效价值最高为2.193，结果表明，通过对小鼠的免疫、对细胞的融合及对杂交瘤细胞的筛选再经有限稀释法培养，最终得到了可以分泌单一稳定的抗SM2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为更进一步研发快速对药物残留检验得ELISA试剂盒打下了方法基础。

关键词 磺胺二甲嘧啶；人工抗原；单克隆抗体；杂交瘤细胞筛选

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 磺胺二甲嘧啶简介-1

1.2 磺胺二甲嘧啶的用途-1

1.2.1 正确用途-1

1.2.2 非法用途-1

1.3 磺胺二甲嘧啶在机体中的代谢与危害-2

1.3.1 磺胺二甲嘧啶在机体内的代谢-2

1.3.2 磺胺二甲嘧啶的主要危害-2

1.4 磺胺类药物残留的检验方法及发展趋势-2

1.4.1 药物残留检测方法-2

1.4.2 检测方法发展趋势-3

1.5 小鼠免疫原理-3

1.6 细胞培养的简介-4

1.7 单克隆抗体-4

1.7.1 单克隆抗体的简介-4

1.7.2 杂交瘤细胞的筛选-4

1.7.3 单克隆抗体的应用-5

1.8 磺胺二甲嘧啶单克隆抗体研究意义-5

2 材料与方法-6

2.1 材料与方法-6

2.1.1 实验试剂-6

2.1.2 实验器材-6

2.1.3 实验材料-7

2.2 实验方法-7

2.2.1 人工抗原的合成-7

2.2.2 动物免疫-8

2.2.3 单克隆抗体的制备-10

3 结果与分析-13

3.1 实验结果-13

3.1.1 酶联免疫结果分析-13

3.2 分析-15

结论-17

致谢-18

参考文献-19