固态发酵法生产耐酸性菊粉酶及酶学性质研究.doc

摘要:菊粉是广泛存在于各种植物中的，是除淀粉外的植物中的另一种储备性多糖，已经发现含有菊粉的植物多达36000种以上。双子叶纲植物中龙胆属、桔梗属、菊属等11个品类的多年生草本植物及单子叶植物纲中的百合属、禾木科等都含有菊粉。譬如，在洋姜[1]的块茎、大理菊（天竺牡丹）的块根、菊科蓟属的根中都含有充足的菊粉。菊粉分子由β-D-呋喃果糖和吡喃菊糖残基聚合而成，果糖残基之间能通过β-2,1-键连接，残基数目不定，呋喃果糖约为31个，吡喃菊糖为1~2个。菊粉拥有保健功效。在一定的温度和pH条件下，菊粉酶能够将菊粉分解，产物为果糖或低聚果糖。果糖是当前已知的世界上最优异、最甜的糖类，果糖的甜度是蔗糖的1.8倍，不仅口感好、升糖指数低，还不容易导致龋齿，因为口腔内微生物不能利用果糖，人体本身能快速利用果糖的器官也只有肝脏。能够产生菊粉酶的微生物来源广泛，品类繁多，获取也十分容易，不断培养并分离可筛选出高产纯种菌株。实验可知菊粉酶在pH为4.0，温度为42℃时有最高酶活，金属离子对酶有激活作用，或者是抑制作用，然而本实验并不明朗。在温度为42℃，pH为4.5时，测得相对的酶活为0.246IU，数值较低，应为外切型菊粉酶。

关键词 菊粉；果糖；菊粉酶；筛选；酶活

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 菊粉及菊粉酶概述-1

1.1.1 菊粉酶的存在形式-2

1.1.2 菊粉酶的性质-3

1.1.3产菊粉酶的微生物及发酵条件研究现状-3

1.1.4 菊粉价值-4

1.2 果糖概述-5

1.2.1 果糖价值-5

2 材料与方法-6

2.1 原料与试剂-6

2.2 仪器与设备-72.3 方法 -7

2.3.1 取土-7

2.3.2 处理-7

2.3.3 菌株的初筛-8

2.3.4 复筛-8

2.3.5 刚果红染色法-8

2.3.6 固态发酵法大规模培养-9

2.3.7 透明圈法判断酶活-9

2.3.8 提纯-9

2.3.9 测酶活-9

3 结果与分析-11

3.1 初筛-11

3.2 复筛-11

3.2.1 透明圈-11

3.2.2 无透明圈或菌株不纯-12

3.3 初步判断酶活-14

3.4 色谱纯菊粉酶-18

3.5 菊粉酶酶活-19

结论-21

致谢-22

参考文献-23