白果（皮）中银杏酸的分离纯化及活性分析.doc

摘要:以白果外种皮为材料，通过单因素和正交实验探讨银杏酸纯化工艺中大孔树脂种类、树脂用量、料液浓度、上柱流速、解吸速度、解吸剂浓度及解吸剂体积等影响银杏酸纯化的因素，确定了最佳纯化工艺条件。结果表明：DM130大孔树脂对银杏酸的吸附和解吸能力均较好；采用DM130树脂对银杏酸进行纯化，树脂用量1 g，在浓度为521.22 μg/mL的供试液中以0.28 mL/min速度进行吸附，吸附后以75%乙醇为解吸剂在体积80 mL条件下以1.11 mL/min流速解吸，此条件下银杏酸含量由13.27%提高到42.75%。

对于经大孔树脂纯化后的银杏酸，经过高速逆流的进一步纯化，即可从银杏酸提取液中分离得到单体组分，经HPLC分析，纯度达95.0%。

纯化后的银杏酸对羟基自由基的清除率达到78.46%，对DPPH自由基的清除率达到79.53%，表明了银杏酸具有一定的清除羟基自由基和DPPH自由基的能力，清除能力与浓度呈较明显的量效关系，具有很好的抗氧化能力，是很好的天然抗氧化剂。

关键词 银杏酸；分离纯化；活性研究

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 银杏酸的组成及其性质-1

1.1.1 银杏酸的组成结构-1

1.1.2 银杏酸的理化性质-2

1.1.3 银杏酸的生理活性-2

1.2 银杏酸的提取方法-2

1.2.1 有机溶剂浸提法-2

1.2.2 超临界CO2萃取法-2

1.2.3 微波萃取法-3

1.3 银杏酸的分离纯化方法-3

1.3.1 大孔树脂分离纯化-3

1.3.2 高速逆流色谱分离纯化-4

1.4 抗氧化机理-6

1.4.1 DPPH自由基的抗氧化机理-6

1.4.2 羟基自由基的清除作用-6

1.5 银杏酸的检测方法及其研究现状-6

1.6 研究目的及意义-7

2 材料与方法-8

2.1 仪器与试剂-8

2.1.1 主要仪器-8

2.1.2 主要试剂-8

2.1.3 主要原材料-8

2.2 银杏酸的检测方法-9

2.2.1 检测条件-9

2.2.2 标准曲线的绘制-9

2.3 银杏酸提取液制备-10

2.4 银杏酸的大孔树脂分离纯化-10

2.4.1 树脂的预处理-10

2.4.2 装柱方法-11

2.4.3 大孔树脂选择-11

2.4.4 大孔树脂条件优化-11

2.4.5 大孔树脂纯化正交实验-12

2.4.6 计算方法-12

2.5 高速逆流色谱分离研究-13

2.5.1 HSCCC溶剂体系的选择-13

2.5.2 高速逆流色谱分离研究-13

2.6 抗氧化性研究-14

2.6.1 银杏酸对羟基自由基清除率的测定-14

2.6.2 DPPH自由基清除率的测定-14

3 结果与分析-16

3.1 大孔树脂的选择及条件优化-16

3.1.1 大孔树脂的选择-16

3.1.2 树脂用量的选择-16

3.1.3 料液浓度的选择-17

3.1.4 上柱速率的选择-18

3.1.5 解吸流速对解吸效果的影响-19

3.1.6 解吸剂浓度对解吸效果的影响-20

3.1.7 解吸剂体积对解吸效果的影响-21

3.1.8 树脂使用次数的确定-22

3.1.9 大孔树脂纯化正交实验-23

3.2 高速逆流色谱的分离及条件优化-24

3.2.1 高速逆流色谱溶剂体系的选择-24

3.2.2 样品溶液的制备-26

3.2.3 高速逆流色谱分离-27

3.2.4 高速逆流色谱的分离效果-27

3.2.5 HSCCC峰成分及纯度测定-27

3.3 银杏酸抗氧化性研究-30

3.3.1 银杏酸对羟基自由基的清除作用-30

3.3.2 银杏酸对DPPH自由基的清除率-31

结论-33

致谢-34

参考文献-35