三聚氰胺单克隆抗体制备与检测_生物工程.doc

摘要:三聚氰胺（Melamine，Mela）是一种化工原料，由于其含氮量高达66.6%，因此常被非法添加到牛乳及饲料中，严重威胁到人类和动物的生命安全。目前的检测方法大多需要专门的仪器设备而且操作繁琐，已无法满足现场快速检测的要求。因此，研究和建立一种方便、快速和安全的检测方法具有深远的意义。本文以三聚氰胺人工抗原免疫14只BALB/c小鼠，经间接ELISA检测小鼠血清效价（1:6400）达到要求后，选择血清效价最高的小鼠（1:12800）的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0用于细胞融合（融合率30.0%），再以HAT培养基选择性培养融合细胞，间接竞争ELISA检测和间接ELISA检测筛选出阳性杂交瘤细胞。最后经过4次有限稀释克隆得到稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为建立检测三聚氰胺在动物组织中残留的免疫分析法奠定了基础。

关键词：三聚氰胺；单克隆抗体；制备；检测

目录

摘要

1 绪论-1

1.1三聚氰胺单克隆抗体-1

1.1.1 农药检测-1

1.1.2三聚氰胺单克隆抗体的简介-1

1.1.3 单克隆抗体的应用-2

1.1.4 三聚氰胺单克隆抗体研究背景-3

1.1.5 本课题的研究目的及意义-3

2材料与方法-4

2.1实验材料-4

2.1.1实验试剂-4

2.1.2 实验仪器-4

2.2实验方法-5

2.2.1 实验所用抗原的一些情况-5

2.2.2小鼠饲养-6

2.2.3动物免疫-6

2.2.4 间接ELISA检测抗血清及单抗效价方法的建立-7

2.2.5 骨髓瘤细胞的培养-7

2.2.6 细胞融合-8

2.2.7 选择杂交瘤细胞及抗体检测-8

2.2.8 筛选杂交瘤细胞-9

2.2.9 杂交瘤细胞的克隆化-9

3结果与分析-11

3.1 实验结果-11

3.1.1间接ELISA方法的建立-11

3.1.2免疫小鼠抗Mela血清效价情况-11

3.1.3 细胞融合情况和阳性孔的筛选-12

3.2 分析与讨论-13

结论-14

致谢-15

参考文献-16