大肠杆菌植酸酶的酶学性质研究.doc

摘要:采用钼蓝法对大肠杆菌植酸酶粗酶液的酶学性质进行研究，并对酶活的测定条件进行了摸索。实验结果表明：在4株待选大肠杆菌中，DH5α产酶活性最高，该菌种在LB培养基培养48h后所获得粗酶液的酶活最高，该粗酶液的最适温度是55 ℃；最适pH为2.5，在pH为7左右也可保持有较好的活性；该酶具有一定的耐热性，在65 ℃保温30 min后酶活仍能保留75%左右，之后酶活就迅速降低，75 ℃只保留30%左右；该酶对不同的pH条件有一定的抗性，在pH值2～9之间分别处理30 min、60 min，该酶依然可以保持60%以上的活性；该酶对KH2PO4抗性较差，较低浓度的KH2PO4（20mg/L）就使该酶的酶活降低到40%以下；多种金属离子没有明显的激活或抑制作用；该酶抗胃蛋白酶不抗胰蛋白酶，分别用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理10min、20min和30min，胰蛋白酶在处理30min后只有66.69%的酶活，而胃蛋白酶处理30min后仍可保持90%以上的活性。

关键词 大肠杆菌；植酸酶；酶学性质；钼蓝法

目录

摘要

Abstract

1绪论-1

 1.1 植酸酶简介-1

1.1.1 植酸酶的来源及特点-1

 1.1.1.1植物植酸酶-1

 1.1.1.2动物植酸酶-1

 1.1.1.3 微生物植酸酶-1

1.1.2 植酸酶的种类-2

1.1.3植酸的性质和结构组成-2

1.1.4 植酸酶活的测定方法-3

1.1.5 植酸酶的应用-3

1.1.6 植酸酶的应用现状与研究方向-4

1.1.7 大肠杆菌产植酸酶应用现状-5

 1.2本论文的研究意义和研究内容-5

1.2.1本论文的研究意义-5

1.2.2本论文的研究内容-5

2材料和方法-6

 2.1实验材料-6

2.1.1菌种-6

2.1.2主要仪器-6

2.1.3 主要试剂-6

2.1.4 培养基-7

 2.1.4.1 LB培养基-7

 2.1.4.2摇瓶产酶培养基-7

 2.2实验方法-7

2.2.1菌种斜面活化-7

2.2.2摇瓶发酵培养-7

2.2.3选择最佳菌种及测定发酵时间-7

2.2.4植酸酶粗酶液的提取-7

2.2.5 酸性植酸酶酶活的测定-8

 2.2.5.1酶活力单位定义-8

 2.2.5.2 试剂的配置-8

 2.2.5.3标准曲线绘制-8

 2.2.5.4样品测定-9

 2.2.5.5结果计算和表示-9

2.2.6 大肠杆菌植酸酶酶学性质的研究-9

 2.2.6.1酶反应的最适pH-9

 2.2.6.2酶的pH稳定性-9

 2.2.6.3酶反应的最适温度-9

 2.2.6.4 酶的热稳定性-10

 2.2.6.5金属离子对酶活的影响-10

 2.2.6.6 KH2PO4对植酸酶的影响-10

 2.2.6.7 胃蛋白酶和胰蛋白酶对植酸酶的影响-10

3 结果与分析-11

 3.1标准曲线的绘制-11

 3.2 最佳菌种及培养基的选择-11

 3.3 培养时间的确定-12

 3.4 培养过程中pH的变化-12

 3.5最适pH的测定-13

 3.6 pH的稳定性-13

 3.7最适温度的确定-14

 3.8温度稳定性-14

 3.9 金属离子对酶活的影响-15

 3.10 KH2PO4对植酸酶的影响-16

 3.11 胃蛋白酶和胰蛋白酶对植酸酶的影响-16

结论-17

致谢-18

参考文献-19