牛磺酸对巨噬细胞内胆固醇浓度的影响.doc

摘要:目的：通过建立泡沫细胞模型，探讨牛磺酸对巨噬细胞内胆固醇浓度的影响。

方法：采用THP-1细胞为研究对象，经PMA诱导为巨噬细胞后，利用MTT法筛选出对正常细胞增殖无影响的牛磺酸浓度范围。使用诱导成功的巨噬细胞，加入ox-LDL建立泡沫细胞模型，再向其中加入不同浓度的牛磺酸，用油红O染色法测定细胞内脂质含量变化。并建立细胞内总胆固醇和游离胆固醇浓度测定方法。

结果与结论：MTT法结果显示，2、5、10、20mM牛磺酸对细胞增殖无显著性影响，大于30mM的牛磺酸对细胞增殖有抑制作用。THP-1细胞在终浓度为80μg/ml 的ox-LDL下诱导48h，油红O染色显示细胞内脂质含量明显高于正常组的，泡沫细胞模型建立成功。在此基础上加入牛磺酸，结果显示20mM牛磺酸对细胞内脂质含量有降低作用。最后初步建立细胞内总胆固醇浓度和游离胆固醇浓度的检测方法，为今后精确测定细胞胆固醇浓度打下了基础。

关键词：牛磺酸  胆固醇  THP-1细胞

目录

摘要

Abstract

引言

1 材料与方法-2

1.1 材料-2

1.1.1 细胞株-2

1.1.2 主要试剂-2

1.1.2.1细胞培养试剂-2

1.1.2.2油红O（Oil Red）染色试剂-2

1.1.2.3细胞内胆固醇测定试剂-2

1.1.3 主要仪器-3

1.2 实验方法-4

1.2.1细胞培养-4

1.2.1.1细胞复苏-4

1.2.1.2 细胞计数-5

1.2.1.3 细胞传代-5

1.2.1.4细胞冻存-5

1.2.2建立巨噬细胞模型-5

1.2.3巨噬细胞性泡沫细胞模型建立-6

1.2.4 MTT法测定牛磺酸对巨噬细胞增殖影响-6

1.2.5油红O染色-6

1.2.6 细胞内胆固醇测定-6

1.2.6.1测试液的配制-6

1.2.6.2标准品的配制-7

1.2.6.3细胞内胆固醇测定-7

1.2.7 统计学方法-9

2.1泡沫细胞模型建立-10

2.2牛磺酸浓度筛选-10

2.3牛磺酸对细胞内脂质含量的影响-12

2.4细胞内胆固醇测定结果-14

2.4.1胆固醇标准曲线-14

2.4.2 蛋白质标准曲线-14

3 讨论-16

结论

参考文献

致谢