抗甲型流感病毒的微生物学研究.doc

摘要:目的：通过本实验建立抗甲型流感病毒药物的细胞筛选模型，应用于抗甲型流感病毒的筛选。并且对多种微生物发酵液进行筛选，确定对甲型流感病毒有一定抑制作用的微生物菌株。

方法：将生长状态良好的MDCK细胞稀释至一定浓度，接种于96孔板；同时设立对照组。再加入适量待筛选发酵液与细胞共同孵育2h后加入适量流感病毒吸附细胞，置于孵箱中培养3~4天，以观察到的细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)为指标，进行发酵液的筛选。

结果：发现对甲型流感病毒有抑制作用的发酵液共23种。

结论：此实验建立了抗甲型流感病毒的药筛模型。共筛选发酵液2400种，其中对甲型流感病毒有抑制作用的有23种。本次试验只是对发酵液的最初的筛选，后期需对阳性发酵液进行复筛，以期发现对甲型流感病毒有很好抑制作用的微生物发酵液，供进一步研究。

   关键词：甲流病毒，MDCK细胞，细胞病变

目录

摘要

Abstract 

引言

1实验材料 2

1.1实验细胞2

1.1.1质粒2

1.1.2实验细胞株2

1.2实验病毒3

1.3实验器材3

1.4实验试剂3

1.4.1细胞培养基3

1.4.2细胞维持液3

1.4.3微生物发酵液3

1.5其他耗材3

2.实验方法 4

2.1质粒转化4

2.2质粒的中量提取4

2.3细胞复试5

2.4 MDCK及HEK 293T细胞培养5

2.5细胞冻存5

2.6甲型流感病毒（IAV）的制备6

2.7病毒滴度的测定6

2.7.1细胞铺板7

2.7.2制备梯度稀释的病毒液7

2.7.3病毒与细胞混合7

2.8阳性对照药物的配制8

2.9抗甲型流感病毒H1N1发酵液筛选方法8

2.10细胞病变（CPE）评价抗病毒疗效8

3.实验结果 9

3.1甲流病毒对细胞的病变作用 9

3.2微生物发酵液的筛选结果 10

4.讨论12

结论

致谢

参考文献