嗜盐古菌质粒pT3稳定性研究.doc

摘要:嗜盐古菌是生活在高盐环境中的一种非常有应用前景的新型的微生物源。嗜盐古菌质粒可以作为特殊的质粒载体，在基因工程领域具有重要的应用前景，质粒的稳定性是其中一个重要指标。资清芳和倪江勇分别利用冻融法和传代的方法对嗜盐古菌Halorubrum sp.T3菌株的质粒进行稳定性研究，得出的结果却不一致，一个是比较稳定，而另一个则不稳定。本实验为了验证pT3质粒是否稳定，采用化学试剂溴化乙锭结合连续传代实验对含有一野生型质粒pT3的宿主菌嗜盐古菌T3菌株进行质粒消除，探究其质粒的稳定性。首先，确定嗜盐古菌T3菌株能够生长的最大溴化乙锭浓度为30μg/mL。然后将嗜盐古菌T3菌株在溴化乙锭浓度为30μg/mL的条件下在18%MGM的液体培养基中进行传代，并每隔两代提取质粒DNA进行电泳检测。探索嗜盐古菌Halorubrum sp.T3菌株的质粒稳定性。经过连续12代的培养后，电泳检测结果显示，该野生型质粒在其宿主体内很稳定，pT3质粒均未从其宿主菌种消除，说明pT3质粒比较稳定。

关键词：嗜盐古菌；溴化乙锭；质粒消除

目录

摘要

Abstract

1.前言-1

1.1  嗜盐古菌简介-1

1.2　微生物质粒DNA简介-2

1.3　质粒消除-2

1.4　本研究的意义-3

2.材料与方法-4

2.1  仪器-4

2.2  药品-4

2.3  菌种的来源-5

2.4  MGM培养基的制作-5

2.5  灭菌方法-5

2.6  质粒DNA的提取和纯化-6

2.7  电泳检测-7

2.8  溴化乙锭使T3质粒消除实验-7

3.结果与分析-9

3.1  未处理T3菌株质粒pT3的提取结果-9

3.2  处理后质粒电泳检测-9

4.讨论-11

5.结论-12

参考文献-13

致　谢-15