亚硝化细菌复合诱变育种的研究.doc

摘要：本文采用原生质体诱变技术，以氯化锂和紫外线诱变亚硝化细菌原生质体。亚硝化细菌菌液加入浓度为40 μg/mL氨苄青霉素钠，24 ℃作用6 d至生长对数期，加入浓度为0.5 μg/mL溶菌酶，40 ℃处理15 min。实验结果表明：亚硝化细菌原生质体再生菌落的致死率随氯化锂诱变浓度和紫外线照射时间的增加而逐渐增大，当诱变条件为30sUV+0.1%LiCl时，致死率为73.3%。当诱变条件为30sUV+0.1%LiCl、30sUV+0.25%LiCl、30sUV+0.4%LiCl时，分别筛选出一株诱变菌株，其亚硝酸盐氮最高含量与未诱变比较有一定的提高，其中FH001诱变菌株亚硝酸盐氮富集能力最好，将其进行250 mL、500 mL扩大化液体培养，菌种亚硝酸盐氮富集能力与未诱变菌株相比有一定的提高，当进行500 mL扩大培养时，氨氮最高去除率达到77.13%。

关键词：亚硝化细菌；复合诱变；原生质体；氯化锂；紫外线

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 亚硝化细菌的研究概况-1

1.1.1 亚硝化细菌的性质和作用-1

1.1.2 亚硝化细菌的培养和生长-1

1.1.3 亚硝化细菌的应用前景-2

1.2 诱变技术的研究-3

1.2.1 物理诱变-3

1.2.2 化学诱变-4

1.2.3 复合诱变-5

1.3 原生质体诱变技术-6

2 材料和方法-7

2.1材料和试剂-7

2.1.1材料-7

2.1.2试剂-7

2.1.3 实验设备-8

2.2 实验方法-8

2.2.1 培养基的制备-8

2.2.2 亚硝化细菌的液体培养-9

2.2.3 亚硝化细菌原生质体制备-9

2.2.4 原生质体的复合诱变-9

2.2.5 亚硝酸盐氮的测定—α-萘胺分光光度法-9

2.2.6 氨氮含量的测定—纳氏试剂分光光度法-10

2.2.7 硝酸盐氮的测定—酚二磺酸分光光度法-11

2.2.8 优良菌株的扩大培养-12

3 结果与讨论-13

3.1诱变后亚硝化细菌原生质体再生菌落形态-13

3.2 复合诱变与致死率的关系-14

3.3 菌株亚硝酸盐氮含量测定-15

3.4 扩大培养-17

3.5优良菌株脱氮能力的研究-19

结论-21

致谢-22

参考文献-23