强力霉素人工抗原的合成与抗体制备.doc

摘要：强力霉素大量不合理使用、甚至滥用造成兽药在食品中的大量残留，已严重影响到人们的健康安全。如何快速检测成为当前急需解决的问题。但强力霉素属小分子，只可以作为半抗原，只能与载体蛋白结合才能产生抗体诱导的能力。以强力霉素为材料，采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白BSA连接以制备强力霉素—牛血清白蛋白人工免疫抗原，并用同样的方法将强力霉素与载体蛋白OVA连接以制备人强力霉素—卵清白蛋白人工包被抗原。过程中先用化学法鉴定，经紫外扫描分析和动物免疫试验证实:对合成人工的人工抗原纯化后，经过紫外分光光度计扫描结果，半抗原与人工抗原的最大吸收波长显著不同，间接说明偶联成功，强力霉素与载体蛋白BSA的偶联比为3:1，强力霉素与载体蛋白OVA的结合比是4:1。经动物免疫试验所得抗血清效价为1:10000。

关键词  强力霉素；人工抗原；抗体；合成；制备

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1兽药残留现状-1

1.1.1抗生素残留-1

1.1.2农药及重金属等其他化学物质残留-1

1.1.3 兴奋剂残留-2

1.2兽药残留的原因-2

1.2.1非法使用违禁或淘汰药物-2

1.2.2错误和滥用药物-2

1.2.3不遵守国家休药期的规定-3

1.2.4动物屠宰前用药-3

1.3兽药残留的危害-3

1.3.1毒性作用-3

1.3.2过敏反应和激素作用-3

1.3.3耐药菌株的产生-3

1.4畜禽兽药残留的控制措施-4

1.4.1完善药物残留控制管理体系-4

1.4.2加强药物残留检测工作-4

1.4.3预防畜禽发生疾病 ，要坚持预防为主的原则-4

1.4.4积极开展兽药残留国际合作与交流-4

1.4.5大力宣传动物性食品兽药残留的危害性-5

1.5对抗生素残留的检测方法-5

1.5.1微生物检测法-5

1.5.2液相色谱法和毛细管电泳法-5

1.5.3气相色谱法-5

1.5.4免疫测定法-6

1.6本项目研究的目的、意义-6

2 材料与方法-7

2.1主要试剂-7

2.2主要仪器-8

2.3透析袋处理方法-8

2.4 磷酸缓冲液配置方法-8

2.5 实验方法-8

2.5.1强力霉素免疫原的制备-8

2.5.2强力霉素包被原的制备-9

2.5.3 人工抗原的纯化-9

2.5.4强力霉素完全抗原的鉴定-9

2.5.5小鼠免疫-11

2.5.6抗体质量评价-11

3 结果与分析-12

3.1蛋白质标准曲线制作-12

3.1.1偶联物浓度与结合比的计算-12

3.2强力霉素与BSA和OVA偶联物的紫外光谱分析-12

3.2.1讨论-15

3.3 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定-16

3.4 三氯化铁化学鉴定结果分析-17

3.5动物免疫试验结果及抗体质量评价-17

3.5.1讨论-17

结论-19

致谢-20

参考文献-21