漆酶高产菌株的筛选与菌种鉴定.doc

摘要：漆酶是一种含多个铜原子的多酚氧化酶，能催化氧化多种芳香族化合物，在木质素矿化降解、腐殖质形成等过程中发挥重要作用。其应用主要集中在以下几方面:参与有机合成，生物检测，有毒化合物的消除，工业废水处理，纸浆的生物漂白等。

本实验从徐州工程学院周围土壤中筛选到一株高产漆酶的菌株，进一步对其进行了菌株的鉴定与生理生化的鉴定研究。

通过对其生理生化性质研究表明该菌株的菌体具有运动性，且需氧；接触酶实验表明该菌是革兰氏阳性菌，能产生过氧化氢酶；明胶液化实验表明，该菌能产生明胶酶，将明胶分解成氨基酸；柠檬酸盐实验表明该菌能利用柠檬酸盐作为碳源；在L-精氨酸利用与L-半胱氨酸实验中，该菌都能利用唯一碳源在培养基上生长，且明显超过基础培养基；甲基红实验表明该菌能分解葡萄糖产生大量酸性产物，使甲基红指示剂变红，显阳性；酪素水解实验表明该菌能分解酪素而使菌落周围呈现透明；Tween80降解实验、0.1%刚果红耐受实验结果也是阳性。

最后对其进行16S rDNA鉴定，最终确定了该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

关键词：漆酶；筛选；鉴定；生理生化性质；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 漆酶的研究现状-1

1.1.1 漆酶的化学组成-1

1.1.2 漆酶的氧化特性-1

1.2 漆酶的研究进展-1

1.3 漆酶的现实应用-2

1.3.1 在食品工业中的应用-2

1.3.2 在造纸工业中的应用-2

1.3.3 在环境保护中的应用-3

1.3.4 在合成方面的应用-3

1.3.5 智能包装指示剂及生物检测-4

1.3.6 在生物肥料中的应用-4

1.3.7 在医药卫生中的应用-4

1.4 漆酶的研究意义-4

2 材料与方法-6

2.1 仪器与试剂-6

2.1.1 主要试剂-6

2.1.2 主要仪器-6

2.2 菌株的分离筛选-7

2.2.1 土壤样品采集-7

2.2.2 菌株的筛选-7

2.2.2.1 菌落的初筛-7

2.2.2.2 菌落的复筛-7

2.2.2.3 菌种保存-7

2.2.3 培养基的制备-7

2.3 菌种的鉴定-8

2.3.1 形态学、生理生化特征测定-8

2.3.1.1运动性-8

2.3.1.2需氧性-8

2.3.1.3 接触酶试验-8

2.3.1.4 明胶液化试验-9

2.3.1.5 柠檬酸盐利用-9

2.3.1.6 L-精氨酸利用-9

2.3.1.7 L-半胱氨酸的利用-9

2.3.1.8 甲基红试验-9

2.3.1.9 酪素水解试验-9

2.3.1.10 Tween 80降解试验-9

2.3.1.11 0.1%刚果红耐受试验-9

2.3.2 分子生物学方法鉴定-9

2.3.2.1 提取基因组-10

2.3.2.2 提取基因组结果检测-10

2.3.2.3 16S rDNA的扩增-10

2.3.2.4 PCR结果的检测-11

2.3.2.5 PCR产物的回收-11

2.3.2.6 16S rDNA测序-12

3 结果与讨论-13

3.1 菌株的筛选-13

3.2 生理生化特征-13

3.2.1 运动性-13

3.2.2 需氧性-13

3.2.3 接触酶实验-14

3.2.4 明胶液化试验-14

3.2.5 柠檬酸盐利用-14

3.2.6 L-精氨酸利用-15

3.2.7 L-半胱氨酸利用-15

3.2.8 甲基红实验-16

3.2.9 酪素水解-16

3.2.10  Tween 80降解实验-17

3.2.11 0.1 %刚果红耐受试验-17

3.2.12 小结-18

3.3  菌种鉴定-18

3.3.1菌株DNA提取-18

3.3.2 16S rDNA测序结果-19

结论-21

致谢-22

参考文献-23

附录-25