内切型菊粉酶发酵培养基的优化研究.doc

摘要：本课题以食品生物工程实验中心酶工程实验室保藏的黑曲霉作为菌源，经过液体深层发酵培养生产内切型菊粉酶。从20株菌株中筛选出一株菊粉酶酶活最高的菌株，为编号E133131的菌株，酶活为0.66 U/mL。

对E133131菌株进行发酵培养基的多种营养条件（碳源、氮源、无机盐）试验，先进行单因素试验，通过测定酶活，利用正交实验法确定内切型菊粉酶生产的最佳发酵培养基配方。

实验结果表明：在碳源的利用试验中，最佳的碳源是蔗糖（7 %）；在氮源的利用试验中，最佳的有机氮源是酵母膏（2 %）；最佳的无机氮源是磷酸氢二氨（1 %）；在无机盐利用试验中，最佳无机盐为氯化钙（0.5 %）。

在单因素试验的基础上，进行三因素三水平的正交试验，获得最佳培养基配方为：牛蒡汁10 mL，蔗糖为7 %， 氯化钠 0.5 g， 磷酸氢二钾0.5 g，酵母膏为2%，硫酸铵 0.5 g，(NH4)2HPO4为1 %，蒸馏水 100 mL，在此配方的发酵培养基中进行内切型菊粉酶的生产，内切型菊粉酶的酶活为1.29 U/mL。

关键词 内切型菊粉酶；发酵培养基；碳源；氮源；无机盐

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 低聚果糖简介-1

1.2 菊粉酶的简介-1

1.2.1 菊粉酶的概念-1

1.2.2 菊粉酶的来源-1

1.2.3 菊粉酶的分类-1

1.2.4 菊粉酶的性质-2

1.2.5 菊粉酶的应用-2

1.3 本实验研究的内容与意义-3

1.3.1 研究内容-3

1.3.2 研究意义-3

2 材料与方法-4

2.1 实验材料与试剂-4

2.1.1 实验材料-4

2.1.2 试剂-4

2.2 实验设备与仪器-5

2.3 实验方法-5

2.3.1 牛蒡汁的制备-5

2.3.2 培养基的制备-5

2.3.3 标准曲线的建立-6

2.3.4 菊粉酶酶活的测定-7

2.3.5 黑曲霉菌种的活化与筛选-7

2.4 实验设计-7

2.4.1单因素实验-7

2.4.2 正交试验-7

3 结果与分析-9

3.1 标准曲线的绘制-9

3.2 酶活的测定-10

3.3 菌种的筛选-10

3.4 单因素实验-11

3.4.1碳源利用实验-11

3.4.2氮源利用实验-13

3.4.3无机盐利用实验-17

3.5 正交试验-19

结论-20

致谢-21

参考文献-22