富锗黑木耳对小鼠肠道菌群的影响.doc

摘要：本文对富锗黑木耳对小鼠肠道菌群的影响进行了研究。前期进行富锗黑木耳菌丝体的种子培养、发酵，获得富锗黑木耳菌丝体，后期通过设置4个对照组：空白组（正常喂食/10只）、对照组（喂0.9%NaCl生理盐水溶液/10只）、实验组（喂富锗黑木耳菌丝体粉末溶液/5只）、急性毒理组（一次性喂大量富锗菌丝体粉末溶液/5只）。进行15天的喂养，在第15天的时候收集各小组小鼠的粪便少许于EP管中，然后提取粪便中的大肠杆菌和乳酸杆菌的DNA并进行纯化。最后对提取出来的肠道菌群的DNA进行荧光PCR，测定大肠杆菌和乳酸杆菌的数量。

实验结果表明：喂富锗黑木耳菌丝体的小鼠肠道内的大肠杆菌数量未见明显变化，乳酸杆菌数量明显增加，经口毒理性实验表明大剂量的富锗黑木耳对小鼠没有特别影响, 富锗黑木耳对小鼠没有急性毒性。

富锗黑木耳对肠道菌大肠杆菌无明显的调节作用，对乳酸杆菌的生长有促进作用。

关键词：锗；黑木耳；肠道菌群；大肠杆菌；乳酸杆菌；16S rDNA；荧光定量PCR

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 黑木耳的概述-1

1.2 黑木耳的营养成分-1

1.3 黑木耳的功能性成分及药用价值研究-1

1.3.1 功能性成分-1

1.3.2 黑木耳的药用价值-1

1.4 锗的概述-2

1.5 食药用真菌富集微量元素概述-4

1.5.1 食药用真菌富集微量元素的机理-4

1.5.2 食药用真菌作为微量元素载体的优点-4

1.6 本研究的立题依据及研究的目的和意义-4

2 材料与方法-6

2.1 供试菌种-6

2.2 主要试剂-6

2.3 主要设备-7

2.4 培养基及培养条件-7

2.5 实验方法-7

2.5.1 黑木耳菌种的活化-7

2.5.2 黑木耳富锗培养-8

2.5.3 培养条件的优化-9

2.5.4 菌丝体的收集-9

2.5.5 生物量的测定方法-9

2.5.6 黑木耳菌体中锗的含量测定-9

2.5.7 小鼠的喂养与分组实验-11

2.5.8 小鼠肠道菌群样品的收集-11

2.5.9 统计学分析-11

3 结果与分析-12

3.1 小鼠粪便样品中菌群的DNA提取和纯化-12

3.1.1  DNA 的提取-12

3.1.2  DNA 的纯化-12

3.2  DNA标准品的制备-12

3.3 荧光定量 PCR 反应-12

3.3.1 引物的设计-12

3.3.2 引物特异性-13

3.4 标准曲线的制作-13

3.4.1大肠杆菌的标准曲线-14

3.4.2 乳酸杆菌的标准曲线-14

3.5 小鼠肠道菌群样品16S rDNA定量分析-14

3.6 富锗黑木耳对小鼠肠道大肠杆菌及乳酸杆菌的影响-15

3.7 经口毒理性实验-15

结论-16

致谢-17

参考文献-18

附录-20