短小芽孢杆菌阿魏酸酯酶酶学性质研究.doc

摘要：阿魏酸酯酶是能够把阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯及多糖阿魏酸酯中的酯键水解掉，游离出阿魏酸的一种酶。它可以分解木质素和植物细胞壁中的多糖-多糖之间的交联结构。

实验采用硫酸铵盐析、树脂吸附等分离纯化方法，并测定了其部分酶学性质。结果表明，硫酸铵在浓度60%时分离的物质活性最大。酶反应的最适温度为35 ℃，最适pH为6.0，酶在pH6.0～7.0范围内活性稳定；Ca2+对酶活性有显著的激活作用，Cu2+、Mn2+、Zn2+有一定的抑制作用；0.25 mol/L的NaCl对酶活性的激活作用最大；多种有机溶剂对酶活性有明显的抑制作用；Triton X-100和Tween-80对酶活性有显著的激活作用， CTAB对其有一定激活促进作用，SDS对其几乎没有影响。

关键词：阿魏酸酯酶；分离纯化；酶学性质

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 阿魏酸酯酶研究现状-1

1.1.2 阿魏酸酯酶的种类-1

1.1.3 阿魏酸酯酶的结构特征和催化机理-1

1.1.5 阿魏酸的功能-4

1.2 阿魏酸酯酶的研究意义-5

2 材料与方法-6

2.1 仪器与试剂-6

2.1.1 主要仪器-6

2.1.2 主要试剂-6

2.1.3 实验菌种-8

2.2 培养基及配制方法-8

2.3 阿魏酸酯酶酶活测定-8

2.4 阿魏酸酯酶的分离纯化-8

2.4.1 硫酸铵盐析-8

2.4.2 透析-8

2.4.3 “724”阳离子交换树脂吸附-9

2.4.4　DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析-9

2.5 阿魏酸酯酶酶学性质研究-10

2.5.1 最适反应温度的测定-10

2.5.2 热稳定性的测定-10

2.5.3 最适pH值的测定-10

2.5.4 酸碱稳定性的测定-11

2.5.5 金属离子对酶活力的影响的测定-11

2.5.6 NaCl对酶活力的影响的测定-11

2.5.7有机溶剂对酶活力的影响的测定-11

2.5.8表面活性剂对酶活力的影响的测定-11

3 结果与讨论-12

3.1 阿魏酸酯酶的分离纯化-12

3.1.1 硫酸铵盐析-12

3.1.2 树脂吸附分离纯化-12

3.1.3 离子交换层析-13

3.2 阿魏酸酯酶酶学性质-13

3.2.1 最适反应温度-13

3.2.2 酶的热稳定性-14

3.2.3 酶的最适pH值-14

3.2.4 酶的酸碱稳定性-15

3.2.5 金属离子对酶活力的影响-16

3.2.6 不同浓度NaCl对酶活力的影响-16

3.2.7 有机溶剂对酶活力的影响-16

3.2.8 表面活性剂对酶活力的影响-17

结论-18

致谢-19

参考文献-20