产琼脂酶菌株HS-1鉴定及初步分离纯化.doc

摘要：琼脂酶是一种多糖水解酶，来源比较广泛，主要是来自微生物和一些软体动物体内。Groleau第一次从海水中分离得到琼脂的分解细菌一琼脂假单胞菌。按照其裂解糖苷键的不同，可以将琼脂酶分为α-琼脂酶和β-琼脂酶这两大类型。根据其裂解酶的底物专一性可以将琼脂酶的作用机制分为两种。到目前为止，只有极少数几种琼脂酶的基因得到了克隆与测序。琼脂酶在多糖结构的研究中、琼脂寡糖的制备、分子生物学研究方面、海藻单细胞的制备、海藻酶解的工具酶及在藻类致病中具有重要的应用价值，因此，对琼脂酶的研究具有重要的理论意义和经济价值。

本研究采用了多种生理生化试验和前期的16S rDNA来鉴定该菌种为革兰氏阳性菌，是蜡样芽孢杆菌。利用硫酸铵沉淀、透析、葡聚糖凝胶G-75柱层析、树脂交换层析等分离纯化技术对其发酵液中的酶蛋白进行分离纯化，再用蛋白质电泳初步得出其分子量。

关键词  琼脂酶；鉴定；活性；分离纯化

目录

摘要

Abstract

1绪论-1

1.1琼脂酶的研究概况-1

1.1.1 琼脂-1

1.1.2 琼脂酶的研究背景-1

1.1.3 琼脂酶的来源-2

1.1.4 琼脂酶的酶系-3

1.2 琼脂酶的作用机制-3

1.3 琼脂酶的分子生物学研究-4

1.4琼脂酶的应用研究-4

1.4.1在多糖结构研究中的应用-4

1.4.2 用于琼脂寡糖的制备-5

1.4.3 在分子生物学研究中的应用-5

1.4.4在海藻单细胞制备中的应用-5

1.4.5 用作海藻酶解的工具酶-5

1.4.6在藻类致病中的作用-6

1.5本课题的研究内容-6

2材料与方法-7

2.1试验材料-7

2.1.1样品来源-7

2.1.2 培养基-7

2.1.3主要试剂-8

2.1.4主要仪器-8

2.2 实验方法-9

2.2.1菌种的活化-9

2.2.2 产琼脂酶菌株的生理生化鉴定-9

2.2.3 酶活的测定-10

2.2.4 产琼脂酶菌株的分离纯化-11

2.2.5 SDS-PAGE 纯度鉴定-11

3 结果与分析-12

3.1 产琼脂酶菌株生理生化鉴定结果分析-12

3.1.1 糖酵解试验-12

3.1.2 淀粉水解试验-12

3.1.3 甲基红试验-13

3.1.4 吲哚试验-13

3.1.5 硝酸盐试验-14

3.1.6 明胶试验-14

3.1.7 尿素酶试验-15

3.1.8 硫化氢试验-15

3.2酶活的测定-16

3.3 产琼脂酶菌株的分离纯化结果分析-16

3.3.1 Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析-16

3.3.2 阴离子交换层析-17

3.4 SDS-PAGE 纯度鉴定结果分析-18

4 结论-19

致谢-20

参考文献-21