枯草芽孢杆菌抗菌蛋白的应用性研究.doc

摘要:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是自然界中广泛存在的一种非致病性细菌，对酸碱度要求不高，热稳定性好，有机溶剂对其活性影响不大，在生长代谢过程中能够产生多种抗菌物质，包括非核糖体合成的脂肽类抗生素(lipopeptide antibiotics)、核糖体合成的羊毛硫抗生素(lantibiotics)和抗菌蛋白。这些抗菌物质可以抑制细菌、真菌和酵母，在食品、医药、化工和防治植物病害等方面有重要的应用价值。

本实验从样品中分离得到了一株具有抗菌活性高、抗菌谱广的芽孢杆菌。并对菌株进行了鉴定，研究证实，分离出的L-13具有广谱抗菌作用，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌都有一定的拮抗作用，特别是对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌抗菌作用较强。对分离出的芽孢杆菌L-13进行形态及生理生化试验初步鉴定为枯草芽孢杆菌。

考察了L-13产生的抗菌蛋白在食品中的防腐效果，结果表明，抗菌蛋白在新鲜猪肉、水果、牛奶中的保藏中具有明显的防腐效果，猪肉样品添加抗菌蛋白在4℃保存14d后与对照相比细菌总数相差4个数量级，防腐效果显著。

关键词：枯草芽孢杆菌；抗菌蛋白；防腐

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 芽孢杆菌的研究现状-1

1.1.1 芽孢杆菌的主要特征-1

1.1.2 芽孢杆菌的鉴定-1

1.1.3 芽孢杆菌抗菌性次生代谢产物-2

1.2 抗菌蛋白种类和抑菌机理研究进展-2

1.2.1 抗菌的作用靶点-2

1.2.2 抗菌蛋白种类及作用机理研究-2

1.2.3 抗菌蛋白质的研究展望-3

1.3  抗菌蛋白的现实应用-3

1.3.1食品安全方面-3

1.3.2 植物病害方面-4

1.4  抗菌蛋白的研究意义-4

1.4.1 选题背景-5

1.4.2 研究意义-5

2 材料与方法-6

2.1 仪器与试剂-6

2.1.1 主要试剂-6

2.1.2 主要仪器-6

2.1.3 菌种-6

2.1.4 培养基-7

2.2 菌株的分离筛选-7

2.2.1 土壤样品采集-7

2.2.2 菌株筛选-7

2.2.2.1 平板接种-7

2.2.2.2  分离培养-7

2.2.2.3 拮抗作用测定（氯仿熏蒸法）-7

2.2.2.4 继代培养-8

2.2.2.5 拮抗作用测定-8

2.2.3 菌种保存-8

2.3 菌种特征的测定-8

2.3.1 形态特征观察-8

2.3.1.1菌体形态观察-8

3.2.1.2菌落特征观察-8

2.3.1.3拮抗活性测定-8

2.4 抗菌蛋白的制备-8

2.4.1 粗提液的制备-8

2.4.2  对几种细菌、真菌的拮抗作用-9

2.4.2.1 真菌的拮抗作用-9

2.4.2.2 细菌的拮抗作用-9

2.5 抗菌蛋白的应用性实验-9

2.5.1苹果汁、草莓汁、菠萝汁、牛奶的保藏实验-9

2.5.2猪肉防腐实验-9

2.5.2.1 肉样处理-9

2.5.2.2  细菌总数测定-9

2.5.2.3  猪肉的感官评定-9

2.5.3草莓防腐实验-10

2.5.4馒头防腐实验-10

2.5.5苹果防腐实验-10

3 结果与讨论-11

3.1 菌种的筛选-11

3.2染色结果与形态特征-11

3.3  抗菌蛋白理化性质研究-12

3.3.1 对几种细菌、真菌的拮抗作用-12

3.4 抗菌蛋白的应用性研究-14

3.4.1苹果汁、草莓汁、菠萝汁、牛奶的保藏实验-14

3.4.2猪肉防腐实验-17

3.4.3草莓防腐实验-17

3.4.4馒头防腐实验-18

3.4.5苹果防腐实验-18

4 结论-19

致谢-20

参考文献：-21