甲基对硫磷半抗原、人工抗原的合成及抗体的制备.doc

摘要:近年来，食品中农药残留问题引起人民的广泛关注。本实验主要为研制出高通量、快速、准确的检测甲基对硫磷残留的生物芯片做准备。本研究根据甲基对硫磷的结构特征，对其分子进行改造，引入一定长的间隔臂和活性基团，以农药中间体三氯硫磷为原料合成了甲基对硫磷的半抗原MP5。半抗原结构用红外光谱法进行鉴定。结果证明，MP5半抗原合成成功。通过碳二亚胺法，将半抗原MP5分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）相偶联，制备甲基对硫磷的人工抗原。利用紫外分光光度法对对甲基对硫磷半抗原、人工抗原和载体蛋白进行扫描，观察紫外图谱。结果证明，MP5半抗原与载体蛋白偶联成功。此外，测定不同浓度的半抗原的吸光度，做出半抗原MP5的标准曲线。根据标准曲线计算出偶联物中半抗原的含量，根据偶联物中半抗原与载体蛋白的摩尔浓度的比值，计算出偶联比。MP5与BSA的偶联比为15，与OVA的偶联比为9。用偶联比较高的一种作为免疫原，对BALB/C小鼠进行免疫，获得高效价抗体。抗体效价为15000。

关键词：甲基对硫磷；半抗原；人工抗原；抗体

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 农药残留和食品安全-1

1.1.1农药残留-1

1.1.2 农药残留和食品安全-1

1.1.3 有机磷农药甲基对硫磷-2

1.2农药残留检测技术-3

1.2.1一般检测方法-3

1.2.2快速检测方法-3

1.3实验的目的和意义-4

2 材料与方法-5

2.1 实验材料-5

2.1.1实验动物-5

2.1.2主要仪器-5

2.1.3主要试剂-5

2.2 实验方法-6

2.2.1甲基对硫磷半抗原的合成-7

2.2.2人工抗原的合成-7

2.2.3偶联比的测定-8

2.2.4抗体的制备-9

3 结果与分析-10

3.1甲基对硫磷半抗原分子结构的鉴定-10

3.2人工抗原的合成与鉴定-11

3.3人工抗原偶联比的测定-12

3.4多抗效价的测定-12

3.5讨论-13

结论-14

致谢-15

参考文献-16