锁掷酵母发酵产物中圆酵母素的纯化、鉴定及抗氧化性质研究.doc

摘 要:本实验室前期研究证实锁掷酵母(Sporidiobolus pararoseus)菌株其发酵产物中含有多种天然类胡萝卜素，包括β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、圆酵母素(torulene)、红酵母红素(torularhodin)等成分。现采用有机溶剂法提取得到混合色素溶液，利用硅胶柱层析对其发酵产物中的一种色素——圆酵母素予以分离纯化。进行多次重复过柱洗脱，直至薄层色谱法（TLC）显示只含有一种成分为止。纯化后的色素再通过高效液相色谱(HPLC)、全紫外扫描（DAD）及液质联用分析(LC -MS)对其纯度及种类进行鉴定；而后，采用拉曼（Raman）鉴定其结构。最后采用二苯代苦味酰自由基 (DPPH•)抗氧化体系验证其体外抗氧化能力。通过以上研究得到以下结果：(1) 锁掷酵母发酵产物中的圆酵母素通过硅胶柱层析可以得到有效分离，根据TLC及HPLC结果判定所得色素的纯度大于96%；（2）DAD、LC -MS结果表明，所得到的色素性质与文献报道的圆酵母素结果一致， Raman光谱结果对其结构进行了很好表征；(3) DPPH•自由基清除体系抗氧化体系结果表明：β-胡萝卜素在浓度为8.72×10-6 mol/L时对DPPH•自由基的清除作用为3.78%。番茄红素在8.17×10- 6mol/L时DPPH•自由基的清除率已达到68.96%，而圆酵母素在0.782×10- 5mol/L时DPPH•自由基的清除率为100%，0.782×10- 6mol/L时为53.61%，表明圆酵母素的抗氧化活性强于番茄红素和β-胡萝卜素。综上所述，圆酵母素是一种具有很大潜在价值的天然抗氧化剂。

关键词：锁掷酵母；圆酵母素；纯化；鉴定；体外抗氧化能力

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1 类胡萝卜素的概述-1

1.2 圆酵母素的研究背景-3

1.3类胡萝卜素纯化鉴定技术-3

1.3.1 柱层析-3

1.3.2薄层色谱法(TLC)-3

1.3.3高效液相色谱法（HPLC）-4

1.3.4 液质联用（LC-MS）-4

1.3.5 拉曼光谱（Raman Spectroscopy)-4

1.4 圆酵母素的体外抗氧化能力-5

1.5 存在问题-6

1.6 立题背景和意义-6

1.7 本实验的主要研究内容-6

第2章 实验材料与方法-7

2.1 材料与设备-7

2.1.1锁掷酵母发酵液-7

2.1.2 实验试剂-7

2.1.3 实验仪器-7

2.2 方法-7

2.2.1 破壁-7

2.2.2 色素提取-8

2.2.3 色素分离纯化-8

2.2.4 色素鉴定-8

2.3 圆酵母素体外抗氧化性质-8

第3章 实验结果与讨论-11

3.1 纯化结果-11

3.1.1  TLC检测圆酵母素-11

3.1.2  HPLC检测圆酵母素-11

3.2 色素鉴定-12

3.2.1  圆酵母素的DAD结果-12

3.2.2 液质联用的结果-13

3.2.3 Raman检测圆酵母素结果-14

3.3圆酵母素的抗氧化性-14

第4章 主要结论与展望-17

4.1 主要结论-17

4.2 展望-17

参考文献-18

致谢-20